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人结肠上皮NCM460细胞电阻抗谱的实验研究
目的 研究细胞容积比值(cell volume ratio,CVR)对人结肠上皮NCM460细胞电阻抗谱的影响.方法 采用Agilent 4294A阻抗分析仪测量了不同浓度NCM460细胞的电阻抗值和相位角,经过幅-频曲线和相-频曲线以及Nyquist图的综合分析,提取NCM460细胞的特征参数,观察细胞容积比值对NCM460细胞电生理性能的影响.结果 1)细胞容积比值对阻抗幅值大增量(△Zmax)、相位角峰值(ιp)、低频阻抗值(ReZL)和阻抗虚部峰值(ImZp)等均有影响,并它们与细胞容积比值之间呈线性相关关系;2)特征频率(fc)与细胞容积比值无关,它来源于细胞膜的界面极化效应,是NCM460细胞对交流电场响应的电阻抗谱标志性参数.结论 电阻抗谱方法能够获取NCM460细胞电学特征,为进一步的结肠癌细胞电生理研究提供了观测指标与方法.
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青蒿琥酯对人结肠上皮细胞氧化应激保护效应的分子机制研究
目的 探讨青蒿琥酯对人结肠上皮细胞氧化应激的保护效应,并对其作用机制进行研究.方法 体外原代人结肠上皮细胞传代培养,随机分为空白对照组、H2O2诱导组、H2O2+青蒿琥酯低、中、高剂量组;CCK-8试剂检测人结肠上皮细胞增殖情况,相关试剂盒检测一氧化氮、丙二醛含量及超氧化物歧化酶1活性,Western Blot检测细胞中Jak2、p Jak2、State3、p-State3(Tyr705、Ser727)、血红素氧合酶和超氧化物歧化酶1蛋白表达水平.结果 与H2O2诱导组相比,不同浓度青蒿琥酯可明显促进人结肠上皮细胞的增殖(P＜0.05);明显降低细胞中一氧化氮、丙二醛含量,显著升高超氧化物歧化酶活性(P＜0.05);明显促进血红素氧合酶和超氧化物歧化酶1蛋白的表达,并显著抑制Jak2和State3的磷酸化(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可明显降低人结肠上皮细胞氧化应激损伤,其作用机制可能与抑制Jak2/State3信号通路的激活有关.
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青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应影响的分子机制研究
目的 探讨青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应的影响,并研究青蒿琥酯对人结肠上皮细胞炎症治疗作用的可能机制.方法 体外原代培养人结肠上皮细胞,并分为空白对照组,LPS诱导组,青蒿琥酯低、中、高剂量组,CCK-8法检测青蒿琥酯对人结肠细胞增殖的影响,ELISA法检测青蒿琥酯对人结肠上皮细胞分泌IL-6和TNF-α炎症因子的影响,Western blot检测青蒿琥酯对Traf6/p65信号通路的影响.结果 与LPS诱导组相比,青蒿琥酯能显著改善LPS对人结肠上皮细胞增殖的抑制作用(P＜0.05);与LPS诱导组相比,各剂量青蒿琥酯均显著降低了人结肠上皮细胞分泌的IL-6和TNF-α水平(P＜0.05);免疫印迹法检测发现,各剂量青蒿琥酯组相对LPS诱导组细胞中Traf6和p-p65表达水平明显降低(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可抑制人结肠上皮细胞炎症反应,进而改善炎症对细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与下调Traf6/p65信号通路活化有关.
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基于Notch1信号通路探讨白藜芦醇对人结肠上皮细胞炎症损伤的保护作用
目的 研究白藜芦醇(Res)对人结肠上皮(NCM460)细胞炎症损伤的保护作用及其对Notch1信号通路的影响.方法 体外培养NCM460细胞株,采用脂多糖(LPS,1 mg/L)干预细胞构建炎性损伤模型,低、高剂量Res(40、120 μmol/L)及Notch1激动剂NSC 22423(2μmol/L)处理细胞24 h后,采用CCK8法检测NCM460细胞相对存活率,ELISA实验测定细胞培养液中炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平,Western blot实验分析iNOS、COX-2、Notchl、Hes-1及Math-1蛋白表达水平.结果 与空白对照组相比,LPS组细胞相对存活率明显降低(P＜0.05),炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平显著升高(P＜0.05),iNOS、COX-2、Notch1、Hes-1蛋白表达量明显升高、Math-1蛋白表达显著降低(P＜0.05);与LPS诱导组相比,Res组细胞相对存活率显著升高(P＜0.05),炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平显著降低(P＜0.05),iNOS、COX-2、Notch1、Hes-1蛋白表达量明显降低、Math-1蛋白表达显著升高(P＜0.05);而Res和NSC共同干预NCM460细胞可以逆转上述指标的变化.结论 Res可通过Notch1信号通路调节人结肠上皮细胞的增殖和分化,对溃疡性结肠炎具有保护作用.
关键词： 白藜芦醇 人结肠上皮细胞 炎症 Notch1信号通路 -
人结肠上皮细胞的原代培养
目的:探讨人结肠上皮细胞的分离、体外培养方法,为研究结肠功能及相关疾病提供细胞模型.方法:人正常结肠黏膜取自结肠癌病人手术切除的癌旁正常组织,运用胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化分离,接种于适当培养液内,根据成纤维细胞贴壁时间的差异并运用胶原酶来纯化.结果:联合运用Ⅰ、Ⅳ型胶原酶和嗜热菌蛋白酶消化可分离出健全绒毛隐窝单位,在适当的培养条件下可长出单层不规则形细胞,经鉴定为人结肠上皮细胞.结论:使用合适的方法及培养液,可以分离培养出正常人结肠上皮细胞.
