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HCMV的IE2介导野生型p53基因促凋亡作用的研究
选择野生型P53缺失型的Jurkat细胞系,首先将wt-p53-pLXSN稳定转染入Jurkat细胞(Jurkat-wt-p53),再分别或联合转染IE1、IE2基因,并利用流式细胞仪分析.结果显示,转染了IE2基因的Jurkat-wt-p53细胞在瞬时转染24h后出现光镜下可见的细胞凋亡改变,此时取样进行流式细胞仪测定细胞周期分布状况,可见转染了IE2基因的Jurkat-wt-p53细胞周期分布较其他各组发生了明显的变化,G1期和S期细胞分布减少,而G2期细胞增多,细胞阻滞于G2/M期,并且出现了细胞凋亡亚二倍体峰,引起细胞凋亡.研究表明,在Jurkat细胞中HCMV的IE2基因可介导野生型p53基因的促凋亡作用.
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人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响
目的 研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMV IE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制. 方法 用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组.于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法 检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达.采用PCR方法 从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达.流式细胞术检测细胞周期的变化. 结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P﹤0.05.瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高. 结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系.
