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PSP94-TNFαD11a质粒DNA注射体内表达规律
将带有目的基因PSP94-TNFαD11a的pcDNA3.0质粒DNA,以50μg/只剂量注射到39只雄性昆明小鼠的股四头肌内,第2、3、4、5、10、15、20、25天分别摘眼球取血收集血清,每组3只动物血清混合。同时取注射部位骨骼肌,研磨后离心取上清。用ELSIA方法检测血清和骨骼肌上清中融合蛋白的表达,观察不同时间的蛋白表达水平。提取14天骨骼肌组织的总RNA,进行RT-PCR分析目的基因mRNA的表达水平。结果,在裸质粒注射后9天可检出目的蛋白的表达,第14天出现表达高峰,观察至25天仍可检察到蛋白表达。
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PSP57不是增生和癌变前列腺组织PSP94 mRNA可变剪切特有的产物
目的:比较人正常、增生和癌变前列腺组织中 PSP94 和 PSP57 mRNA的表达情况.方法:提取事故死亡的正常成年人前列腺组织及手术得到的增生和前列腺癌组织总RNA,进行RT-PCR,其产物分别以 PSP94 和 PSP57 共有的外显子及 PSP94 外显子Ⅲ作探针进行Southern blotting分析;RT-PCR产物经克隆后进行序列测定.结果:三种前列腺组织中均有 PSP94 和 PSP57 mRNA的表达;人正常前列腺组织中的 PSP94 及 PSP57 的基因序列与增生前列腺组织和癌变前列腺组织中的完全一致.结论:PSP57 不是增生和癌变前列腺组织中 PSP94 mRNA可变剪切特有的产物.
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重组人PSP94质粒的快速筛选
目的:建立一种快速筛选阳性重组质粒的方法.方法:直接以菌液为模板,采用两条特异性引物,利用PCR筛选人前列腺分泌蛋白94(PSP94)的阳性重组质粒.结果:利用PCR法成功筛选出了阳性重组质粒.结论:PCR法省时、省力,尤其适用于重组质粒的筛选和鉴定.