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胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化
为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.采用刮取手术胃粘膜组织,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化.结果以固相pH梯度--IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(13%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了胃粘膜组织的双向凝胶电泳图谱.
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结肠黏膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立与优化
目的为开展人类结肠黏膜组织的蛋白质组研究,建立并优化其蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法采用电子结肠镜直视下活检钳取结肠黏膜组织,对组织蛋白质的提取方法进行改进以达到考马斯亮蓝法染色所需的浓度,优化双向凝胶电泳的关键因素与环节,如第一向固相pH梯度(IPG)等电聚焦的上样量及电泳参数,第二向垂直平板SDS凝胶浓度等.结果以固相pH梯度-IPG胶条(pH=3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了人类结肠黏膜组织的双向凝胶电泳图谱.平均含333±36个蛋白点,匹配率85.56%.结论优化人类结肠黏膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术可以建立高分辨率和良好重复性的双向凝胶电泳图谱.
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一种新的双向电泳蛋白样品制备方法
目的 探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果 的影响.方法 以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果 通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采用8 mol/L Urea, 2 mol/L Thiourea,4% CHAPS, 1% NP-40,4%TritonX-100,65 mmol/L DTT, 0.5 mmol/L PMSF,0.5% pharmalyte 3-10,能获得质量较高的2-DE图谱.结论 采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品,从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等.
