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C/EBPβ在氧化低密度脂蛋白诱导的白介素1β成熟过程中的作用
目的 探讨CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞白介素1β(IL-1β)成熟过程中的作用.方法 分别用0、25、50、100μg/ml ox-LDL对小鼠巨噬细胞株RAW264.7处理12、24、48h,以不同时间点的0μg/ml ox-LDL为对照组,筛选出50μg/ml ox-LDL处理24h进行后续实验.定量PCR观察C/EBPβ基因表达变化,Western blotting检测C/EBPβ、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、IL-1β前体及成熟体表达的变化.采用小干扰RNA敲减C/EBPβ及caspase-1,采用ELISA法检测IL-1β分泌的变化,Western blottin检测相关蛋白表达的变化.结果 Ox-LDL呈时间剂量依赖性增加C/EBPβ的表达.其中50μg/ml ox-LDL处理24h后,C/EBPβ蛋白表达开始明显上调,平均上调幅度为57％(P＜0.01).同时ox-LDL可明显增加caspase-1、IL-1β前体、IL-1β成熟体的表达(P＜0.05).敲减C/EBPβ能抑制ox-LDL诱导的caspase-1、IL-1β前体、IL-1β成熟体的表达及IL-1β的分泌,平均抑制幅度分别为34％、36％、54％及53％(P＜0.05);而敲减caspase-1仅可抑制IL-1β成熟体的表达及IL-1β的分泌(P＜0.05).结论 C/EBPβ是ox-LDL诱导巨噬细胞产生IL-1β的关键性蛋白,并通过调控caspase-1促进IL-1β前体成熟.
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转录因子C/EBPβ功能研究进展
CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding protein beta,C/EBPβ),也称作核因子白细胞介素-6(nuclear factor for IL-6,NF-IL6),是转录因子CCAAT/增强子结合蛋白( CCAAT/enhancer binding proteins,C/EBPs)家族的重要成员,其C端具有高度保守的DNA结合域和二聚化功能域,主要通过对靶细胞基因转录的调节参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、机体炎症反应等重要生命活动[1].现就C/EBPβ的功能及对人体疾病作用机制的研究进展综述如下.1 C/EBPβ在脂肪细胞形成中作用脂肪细胞的形成由复杂的转录因子网状系统所控制,而KLF4则是脂肪细胞形成必要的早期调节基因.Birsoy等[2]认为,C/EBPβ通过一个严密控制的负反馈圈抑制Krox20和KLF4的表达,KLF4基因沉默可以抑制脂肪细胞形成并可下调C/EBPβ水平.C/EBPβ和δ是诱导脂肪细胞形成早的转录因子,他们通过调节其邻近的启动子元件转录激活了过氧化物酶体增殖物激活受体γ( peroxisome proliferators activated receptor gamma,PPARγ)和C/EBPα基因,而PPARγ和C/EBPα基因作为多效的转录激活因子则能够启动脂肪细胞.
关键词： 转录因子 CCAAT/增强子结合蛋白β 功能 -
糖基化终末产物对人牙周膜干细胞脂向分化相关基因C/EBPβ、PPAR-γ的影响
目的:通过检测CCAAT/增强子结合蛋白β( C/EBPβ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPAR-γ)基因的表达探讨糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)脂向分化能力的影响. 方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养人牙周膜干细胞;成骨、成脂诱导人牙周膜细胞,对其进行干细胞鉴定. 分别成脂诱导正常的人牙周膜干细胞和AGEs刺激下的人牙周膜干细胞,油红O染色观测两组细胞脂滴形成情况. 实时定量聚合酶链反应(Reai time PCR)检测成脂诱导后AGEs刺激下C/EBPβ、PPAR-γ表达的改变. 结果:牙周膜细胞成骨诱导21 d后茜素红染色出现钙化结节;成脂诱导21 d后油红O染色出现脂滴;AGEs刺激后人牙周膜干细胞成脂过程中脂滴的形成增多;Reai time PCR结果显示:AGEs刺激7 d后C/EBPβ、PPAR-γmRNA表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论:AGEs可以促进人牙周膜干细胞的脂向分化并能改变C/EBPβ、PPAR-γmRNA的表达.
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神经营养因子-3对骨髓间充质干细胞增殖凋亡的影响及机制
探讨神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及凋亡的影响及可能机制.方法 将NT-3过表达及干扰慢病毒转染的BMSCs细胞与神经元细胞共培养,分为过表达对照组、NT-3转染组、抑制对照转染组、shRNA-NT-3转染组(NT-3沉默组)4组,MTT检测共培养24 h、48 h、72 h细胞增殖情况;流式细胞术检测48 h细胞周期变化及凋亡情况;实时荧光定量PCR检测C/EBPβ mRNA表达情况;Western blot检测C/EBPβ蛋白表达情况.结果 MTT结果显示,与过表达对照组比较,48 h及72 h时间点NT-3转染组BMSCs细胞增殖能力(0.650±0.042,0.826±0.074)显著增强(P<0.05),与抑制对照转染组比较,48 h及72 h时间点NT-3沉默组BMSCs细胞增殖能力(0.426±0.062,0.516±0.088)显著降低(P<0.05);流式细胞术检测48 h细胞周期及凋亡结果显示,NT-3转染组BMSCs细胞G1期比例降低,G2及S期升高,凋亡减少;NT-3沉默组BMSCs细胞G1期比例升高,G2及S期降低,凋亡增加;荧光定量PCR及Western blot结果表明C/EBPβ mRNA及蛋白水平在NT-3转染组BMSCs细胞中显著上调,而在NT-3沉默组BMSCs细胞中显著降低(P<0.05).结论 NT-3可能通过促进C/EBPβ表达影响其下游相关靶基因的表达,从而抑制BMSCs细胞增殖分化过程中的细胞凋亡.
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C／EBP β在神经退行性疾病炎症反应机制中的作用
C／EBP β在神经炎症方面研究近年来成为热点，越来越多的研究表明，C／EBP β在神经炎症扮演重要角色，本文综述了C／EBP β在神经退行性疾病炎症反应中的作用。2015年6月在PUBMED、中国知网、万方数据库等数据库，利用“C／EBP β”、“神经元”、“神经炎症”等作检索词，分析国内外对于C／EBP β与神经炎症的关系。根据文献的纳入、排除标准汇总文献，并进行总结、归纳和分析。终纳入42篇文章，大部分是研究C／EBP β在神经炎症方面的功能机制。 C／EBP β参与神经炎症的多个信号通路，调控机制复杂，C／EBP β表达降低或调控其基因下调可以作为减轻神经炎症组织损伤的治疗目标，并终可能防止神经退行性疾病的发展。
关键词： CCAAT/增强子结合蛋白β 神经元 神经炎症 -
CTLA-4基因多态性在重症肌无力发病机理中的作用
目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4, CTLA-4)基因第1外显子+49位点、启动区-318、-1661、-1772位点的多态性及其导致的无效转录对重症肌无力(myasthenia gravis, MG)遗传易感性的影响. 方法酶联免疫吸附实验测定MG患者和健康对照血清中可溶性CTLA-4的水平;限制性片段长度多态性分析检测第1外显子+49位点、启动区-318、-1661、-1772位点的多态性;转录因子核因子(nuclear factor 1,NF-1)和CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding protein beta, c/EBPβ)结合位点通过染色质免疫沉淀实验得以验证.结果启动区-1772、-1661位点和第1外显子+49位点的多态性与MG,特别是伴发有胸腺瘤的MG密切相关.启动子-318位点的多态性与MG无关.CTLA-4基因4个多态性位点间有一个明确的正性连锁不平衡关系.MG患者血清可溶性CTLA-4的表达水平与等位基因的突变相关联.-1772、-1661位点的多态性可改变转录因子NF-1和c/EBPβ结合位点,而ConA、PHA则能促进NF-1和c/EBPβ的这种位点特异性转录活性.结论 MG患者 CTLA-4 A/G+49、C/T-1772和A/G-1661多态性可导致无效转录,影响MG的遗传易感性,T→C-1772的突变能影响基因的剪接,从而干扰蛋白的表达和功能.
