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硫代反义脱氧寡核苷酸文献资料
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Sanger测序法确证硫代修饰反义脱氧寡核苷酸的序列
目的:建立一种简便、可靠的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸序列确证方法,为反义药物的质量控制及新药研究与开发奠定基础.方法:选择含有待测反义脱氧寡核苷酸序列在内的一段靶基因为模板,以待测序的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸作为下游引物,同时在其上游设计一条引物,进行PCR扩增,使待测序的反义序列以修饰形式掺入到PCR扩增产物中;以上述掺入反义序列的PCR扩增产物为模板,利用Sanger双脱氧链终止测序法对其进行自动序列分析.结果:该方法可对不同长度硫代修饰的反义序列进行测定,并且可有效地检测出合成过程中产生的突变和缺失序列,与质谱法相比,仪器和试剂更普及,方法易于掌握且测序成本低,用样量少.结论:该方法可用于硫代修饰反义脱氧寡核苷酸药物的序列确证.
关键词： 硫代反义脱氧寡核苷酸 序列分析 反义 寡核苷酸 -
WT-1通过下调c-myb表达抑制U937细胞增殖
目的:研究Wilms瘤基因在白血病发病中的作用机制.方法:采用反义、Northern blot和流式细胞技术分析了硫代反义WT-1基因脱氧寡核苷酸和硫代反义c-myb基因对U937细胞增殖和基因表达的影响.结果:5μmol/L WT1反义脱氧寡核苷酸处理的U937细胞WT1蛋白表达下降37%,c-myb Mrna水平上升不明显;10μmol/L时可抑制其WT1蛋白87%,c-myb Mrna水平上升明显,同时Myb蛋白水平上升46%(P＜0.01).5,10μmol/L c-myb基因反义脱氧寡核苷酸可抑制其Myb蛋白39%、83%(与对照组比较,均P＜0.01),对WT1表达无显著改变.结论:WT1可以通过下调c-myb表达抑制U937细胞增殖基因表达.
关键词： U937细胞 Wilms瘤基因 硫代反义脱氧寡核苷酸
