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CRISPR/Cas技术文献资料
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利用CRISPR／Cas方法建立RNase L基因稳定敲除细胞株
目的：利用CRISPR／Cas9技术建立人RNase L基因稳定敲除的细胞株。方法根据GenBank中RNase L基因序列，设计RNase L敲除的小指导RNA（ sgRNA）序列，将其克隆到pCas-Guide真核表达载体中，获得pCas指导RNA（ gRNA）载体；设计供体DNA的同源臂序列，通过搭桥PCR将左同源臂、潮霉素B抗性基因和右同源臂扩增成为一条片段作为同源重组的修复模板，并将其克隆到pBackZero-T表达载体上，获得pBackZero-T-RNase LK载体。将上述两个载体共转染HEK293细胞，用潮霉素B筛选，通过Western印迹和DNA测序等技术验证RNase L从基因组上敲除。结果与结论成功构建了载体pCas-gRNA和pBackZero-T-RNase LK，Western印迹和DNA测序结果表明，成功获得5株RNase L缺失的细胞株，为探讨RNase L的生物学功能和研究其分子机制奠定了基础。
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CRISPR/Cas技术在生物医药研究中的应用
CRISPR/Cas (Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9)是近年来出现的一种基因组定点编辑新技术,由于它具有突变效率高、操作简单及成本低等巨大优势,所以被广泛地应用于生物医药研究的各个领域,并取得了革命性的变化.该文对CRISPR技术在生物医药研究领域的应用作了综述.检索并归纳相关国内外文献,分别介绍了CRISPR/Cas系统的作用原理、技术流程、研究进展以及该技术可能的应用前景等方面内容,以期为相关领域的科研人员提供有价值的参考.
关键词： CRISPR/Cas技术 生物医药 基因编辑 应用
