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AktSer473文献资料
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PHLPP2基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及对舌癌细胞Tca8113增殖的影响
目的 构建稳定表达PHLPP2小发夹RNA( shRNA)的Tca8113细胞系,研究敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113细胞生长的影响. 方法 利用RNA干扰( RNAi )技术,设计并合成针对PHLPP2 基因的shRNA,并将其克隆到shRNA表达载体PSIH-H1上. 经测序成功后,包装病毒并感染舌癌细胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的稳定细胞株. 通过实时定量PCR( qRT-PCR)和Western印迹实验检测RNAi的干扰效果. 利用Western印迹实验和细胞生长曲线检测敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化及细胞生长的影响. 结果 经测序证明,成功构建PHLPP2 shRNA真核表达载体. qRT-PCR和Western印迹实验证明,构建的shRNA能有效抑制PHLPP2的表达,并构建敲低PHLPP2基因的Tca8113稳定细胞系. 实验表明,敲低PHLPP2可促进细胞的生长并升高Akt Ser473的磷酸化水平. 结论 成功构建PHLPP2基因的shRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制PHLPP2基因的表达,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促进细胞的生长,为进一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及机制奠定了基础.
