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福氏志贺菌Ⅲ型分泌系统效应子IpaH4.5功能的初步研究
目的:IpaH家族是福氏志贺菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应子的成员,但功能不清,特别是对IpaH4.5的研究未见报道.本研究拟探讨IpaH4.5的功能.方法:克隆了福氏志贺菌2a 301株的IpaH4.5基因,构建了带Flag和GFP标签的IpaH4.5真核表达载体.通过Western 印迹和共聚焦确定IpaH4.5在真核细胞293T中的表达和定位,通过报道基因的方法观察IpaH4.5对宿主细胞NF-κB途径的影响.结果:Western 印迹证实IpaH4.5在真核细胞中有表达,激光共聚焦确定IpaH4.5在真核细胞中定位于细胞膜和细胞核,通过报道基因观察到它可以抑制宿主细胞的NF-κB途径.结论:发现IpaH4.5可以抑制NF-κB途径,为进一步研究IpaH4.5的功能奠定了基础.
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蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其分子机制
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其可能的分子机制.方法 经小鼠腋窝皮下注射结肠腺癌C26细胞,建立肿瘤恶病质模型,并设正常对照组(HC组).将模型小鼠分为肿瘤恶病质组(CC组)和MG132治疗组(MG组),待小鼠进入恶病质状态后,CC组小鼠经腹腔注射0.1ml生理盐水,MG组小鼠经腹腔注射0.1mg/kg的MG132,7d后处死小鼠,称量小鼠肿瘤、左侧腓肠肌和附睾脂肪的重量,测量腓肠肌纤维横切面积,ELISA法检测血清中炎性因子TNF-α和IL-6的水平,RT-PCR及Western blot法检测腓肠肌中IKBa、P65、MuRF1和MAFbx基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平.结果 与CC组相比,MG组小鼠腓肠肌和附睾脂肪组织的重量分别增加了31.6％和39.5％(P＜0.05),腓肠肌纤维横切面积增加了36.1％(P＜0.05)；血清中TNF-α和IL-6的水平分别降低了20.9％和42.0％(P＜0.05);腓肠肌组织IKBa基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别升高了132.7％和56.5％(P＜0.05),MuRF1基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了70.1％和42.6％(P＜0.05),MAFbx基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了76.8％和47.3％(P＜0.05),P65基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了59.1％和53.1％(P＜0.05).结论 MG132改善肿瘤恶病质的分子机制可能与抑制NF-κB途径及MuRF1和MAFbx的表达、抑制炎症反应及肿瘤生长有关.
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曲美他嗪对重症肺炎大鼠保护作用的机制研究
目的 探讨曲美他嗪对重症肺炎大鼠的保护作用.方法 将大鼠气管注入肺炎克雷伯菌液,建立重症肺炎大鼠模型,大鼠被分为对照组、模型组和曲美他嗪组,感染的第7、9、11天,参照白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的ELISA试剂盒说明检测血清中IL-6、IL-8的含量;根据吸光度变化计算肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;Western bloting检测感染的第11天肺组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及NF-κB P65的蛋白表达.结果 模型组、曲美他嗪组在第7、9、11天IL-6、IL-8含量及MPO活性均显著高于对照组(P<0.05),而曲美他嗪组在第7天IL-6、IL-8含量与模型组差异无统计学意义(P>0.05),第9天和11天IL-6、IL-8含量均显著低于模型组(P<0.05),三个时间点MPO活性均显著低于模型组(P<0.05);模型组、曲美他嗪组MMP-2、MMP-9、NF-κB P65蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05),而曲美他嗪组MMP-2、MMP-9、NF-κB P65蛋白表达均显著低于模型组(P<0.05).结论 曲美他嗪可通过降低炎症因子IL-6和IL-8含量,抑制MPO活性,下调MMP-2和MMP-9及NF-κB信号通路NF-κB P65蛋白表达,从而对重症肺炎大鼠起保护作用.
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竹节参总皂苷通过抑制NF-κB介导的炎性反应改善小鼠肿瘤恶病质研究
目的 探讨竹节参总皂苷对小鼠结肠癌肿瘤恶病质的改善作用.方法 BALB/c小鼠皮下接种结肠腺癌CT26细胞建立恶病质模型,模型动物随机分为模型组、竹节参总皂苷低、高剂量组,接种后d4开始灌胃给药,每日给药1次,正常与模型组给予10 mL·kg-1生理盐水,低、高剂量组分别给予20、60 mg·kg-1竹节参总皂苷干预,连续给药27 d后处理动物.观察竹节参总皂苷对恶病质小鼠体质量、胫骨前肌、腓肠肌、脾脏和附睾脂肪的影响;HE染色观察腓肠肌纤维横切面积的变化;流式微球试剂盒检测血清中炎性因子TNF-α和IL-1β的表达;Western blot检测腓肠肌与胫骨前肌中NF-κB、PAX7、MuRF1蛋白表达.结果 与模型组相比,竹节参总皂苷能有效改善恶病质小鼠体质量下降(P <0.05),减少肌肉组织降解(P<0.05),同时竹节参总皂苷明显下调恶病质小鼠体内 NF-κB 表达,降低血清中 IL-1β、TNF-ɑ的水平(P<0.05).结论 竹节参总皂苷明显改善小鼠结肠癌恶病质状态,减少肌肉降解,其机制可能与抑制NF-κB介导的炎性因子表达相关.
