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基于液质联用技术的单克隆抗体生物样品定量分析方法的应用
相比常用的配体结合分析（ ligand-binding assay，LBA）方法，液相色谱串联质谱技术（ LC-MS／MS）对单克隆抗体（ mAb）的定量分析特异性更好，方法开发时间更短，效率更高。该文主要综述了LC-MS／MS在mAb定量分析中的应用，以支持mAb药物的定量研究。
关键词： 液相色谱串联质谱(LC-MS/MS) 单克隆抗体 定量 酶联免疫吸附测定 配体 -
液相色谱串联质谱法测定兔眼玻璃体内二十碳五烯酸的浓度
目的:建立适用于兔眼玻璃体内二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)浓度测定的LC-MS/MS方法,为研究EPA在玻璃体内的药动学提供技术支持.方法:应用QTrap 4500液质联用仪,采用电喷雾电离源,在负离子方式选择反应监测(MRM)模式下测定兔眼玻璃体内注射EPA后不同时间的药物浓度.50μL玻璃体样品经乙腈沉淀蛋白并浓缩处理后用于定量分析.色谱分离采用XDB C18柱(50 mm×4.6mm,1.8 μm),流动相为甲醇-水-甲酸(90∶10∶0.1,V/V/V),流速:1.00 mL·min-1;进样量:2μL.监测的离子反应分别为m/z 301.0-m/z 257.3(EPA)和m/z 526.0→m/z 401.0(内标,格列喹酮).每个样品的分析时间为3 min.结果:玻璃体内EPA在0.02 ～5.00 mg·L-1范围内线性关系良好,低定量限为0.02mg·L-1;提取回收率大于90％;日内和日间精密度(RSD)均小于11.6％;基质效应可忽略;EPA玻璃体样品室温放置6h、-20℃放置3d、-70℃一次冻融稳定,处理后样品室温放置20h稳定.兔眼内注射EPA后的主要药动学参数如下:Gmax为1.05 mg·L-1,tmax为0.5 h,t1/2为4.72 h,AUC(0-t)为3.614 mg·L-1·h,AUC(01-∞)为4.296 mg·L-1·h.结论:所建立的EPA浓度测定的LC-MS/MS方法灵敏、准确、简便、稳定,适用于EPA在兔眼内的药动学研究.
