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钆-乙二胺二乙酸-肼基烟酰胺-多肽螯合物MR分子探针的构建及在体肿瘤显像实验研究
目的 构建一种含有精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸(RGD)基序多肽的钆(Gd)类小分子MR分子探针,以特异性显示高表达整合素avβ3受体的肿瘤.方法 肼基烟酰胺(HYNIC)-RGD在乙二胺二乙酸(EDDA)存在的情况下,用三氯化钆(GdCl3)进行标记,用固相萃取(SPE)方法进行分离,得到分子探针Gd-EDDA-HYNIC-RGD.对分子探针进行紫外和MRI信号检测,测量弛豫率.进行3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)细胞毒性实验,将分子探针稀释成0.40、0.20、0.10、0.05 μmol/ml 4个浓度梯度,每个浓度20μl加入到含有人肝癌细胞的培养板内,测量吸光度值,并与未加分子探针的对照组吸光度值进行独立样本t检验.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测BEL-7402人肝癌细胞系和肿瘤组织avβ3受体表达,用免疫荧光观察受体-配体结合情况.建立裸鼠肿瘤模型,将荷瘤裸鼠分为3组,分别由尾静脉注射0.2 ml分子探针、钆喷替酸葡甲胺(Gd-DTPA)和生理盐水,平扫加注药后即刻、30、60和90 min以及24 h分别进行图像采集,对0和90 min信号变化数据进行配对资料t检验.结果 Gd-EDDA-HYNIC-RGD分子探针被成功分离,MR T1 WI信号较强;分子探针弛豫率为3.31 mmoL/s;分子探针浓度在0.1 μmoL/ml以下比较安全;BEL-7402人肝癌细胞系和肿瘤组织表达avβ3受体;受体-配体在体外可以特异性结合;体内实验表明,肿瘤部位平扫和增强90 rain后的平均信号强度分别为2247.6±39.0和2820.9±35.2,增强25%,差异有统计学意义(t=-38.031,P＜0.05);肌肉部位则为1824.2±32.8和1845.8±27.2,信号变化无统计学意义(t=-1.424,P＞0.05);肿瘤信号与肌肉信号两者差值(423.4±56.7和975.1±32.1)有统计学意义(t=-24.650,P＜0.05).肿瘤在注射分子探针、Gd-DTPA和生理盐水后具有不同的增强特点:分子探针组在0～90 min内逐步增强,在90 min信号强;Gd-DTPA在注药后30 min信号强,其后迅速减低;生理盐水组基本无增强;组织学检查显示,肿瘤为典型的恶性形态,血管丰富,可见大量坏死灶.结论 Gd-EDDA-HYNIC-RGD有望成为一种新的MR分子探针,显示高表达avβ3受体肿瘤,为临床提供一种早期诊断和鉴别诊断的可能手段.
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整合素αvβ3在肝星状细胞和肝纤维化组织中的表达
目的 研究整合素avβ3在肝星状细胞和纤维化肝组织中的表达,探讨能反映肝星状细胞活化状态的表型受体.方法 分离大鼠肝星状细胞,体外培养激活.硫代乙酰胺175 mg/kg每周2次,连续12周腹腔注射诱导大鼠肝纤维化.免疫染色观察细胞和组织中整合avβ3和a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达.实时PCR和Western印迹法分析avβ3在星状细胞中、正常和肝纤维化组织中的表达.结果 活化星状细胞中avβ3表达明显上调,与第1天相比,第14天的mRNA和蛋白质水平分别增加18倍和5.2倍.免疫染色整合素avβ3成簇极性表达于活化星状细胞的胞膜.肝纤维化模型中avβ3在mRNA和蛋白水平明显高于正常对照(t=2.39,P＜0.05;t=2.74,P＜0.05),正常肝组织中a-SMA和avβ3局限表达于门静脉周围,肝纤维化组织中a-SMA和avβ3表达于扩大的门管区和纤维间隔.结论 体内外活化星状细胞中整合素avβ3表达水平上调,它是星状细胞活化的表型受体,参与肝纤维化的发生.
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整合素avβ3拮抗剂SB-273005抗小鼠胚胎着床的作用
[目的]探讨整合素avβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床的影响.[方法]雌雄小鼠2：1合笼,次晨检查阴栓,阳性者定为妊娠第1天,记为D1.步骤[1]取D3小鼠40只,随机分为2组,每组20只,实验组连续2 d上午灌胃给SB-273005,于D4下午观察囊胚发育情况.②取D3小鼠80只,随机分为4组,每组20只,A、B、C组为实验组,连续3 d分别灌胃给SB-273005 0．3、1、3 mg·kg-1·d-1,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率.③取D4小鼠40只,随机分为两组,每组20只,实验组双侧宫角注射SB-273005,于D8观察胚胎着床数及统计妊娠率.[4]各对照组用与其相应实验组同方法给同体积二甲亚枫(DMSO).取上述D8处死各组小鼠子宫,观察内膜组织学及D4处死小鼠内膜免疫组化变化.[结果]步骤[1]中实验组与对照组囊胚发育率分别为64．7%和84．5%(P＜0．01).步骤[2]中A、B、C、D组妊娠率分别55%、40%、35%、88%(P＜0．05).步骤[3]中实验组妊娠率为15%．对照组妊娠率为70%,两者相比差异有显著性(P＜0．01).说明SB-273005能降低囊胚发育率、小鼠胚胎着床数及妊娠率.组织学及免疫组化结果表明,SB-273005能引起蜕膜细胞退化解体,抑制整合素avβ3在蜕膜组织中的表达.[结论]整合素avβ3拮抗剂SB-273005对小鼠胚胎着床有抑制作用.
