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鳞癌细胞株放射敏感性与端粒酶活性及端粒长度变化的关系
目的探索放射抗拒鳞癌细胞株放射敏感性的改变与端粒酶活性、端粒长度变化的关系.方法以人喉鳞癌细胞株Hep-2为实验对象,用γ射线反复照射获得具有放射抗拒性细胞株Hep-2R,拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数及端粒酶抑制剂AZT(azidothymidine,叠氮胸苷)作用后的变化,用TRAP-ELISA法测定端粒酶活性(OD值),Southern blotting法分析端粒平均长度(TRF),比较端粒酶活性、端粒平均长度的变化.结果辐射诱导出一个具有放射抗拒性的Hep-2R细胞株,并已稳定传代培养30代以上且放射抗拒性能稳定,测得其SF2=0.6798、D0=3.24,Hep-2R细胞的端粒酶活性较Hep-2细胞升高(0.982±0.005 vs 0.604±0.015),端粒长度延长了2倍(11.12kbvs 3.76kb),AZT作用后Hep-2R细胞株SF2=0.4892、D0=2.51,端粒酶活性下降为0.708±0.011、端粒长度缩短为10.18kb.Hep-2细胞对应的参数SF2=0.4148、D0=2.06,AZT作用后HeP-2细胞SF2=0.3843、D0=1.81,端粒酶活性下降为0.364±0.003、端粒长度缩短为2.76kb.结论辐射诱导细胞获放射抗拒性后其端粒酶活性升高、端粒平均长度增长,端粒酶抑制剂能通过降低端粒酶活性、缩短端粒长度而对其有增敏效应.
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人宫颈癌获得性放射抗拒细胞株(Hela-R)DNA修复能力的观察
目的 观察人宫颈癌获得性放射抗拒细胞株(Heal-R)与其亲本细胞(Hela)DNA修复能力的差异.方法 采用克隆形成实验测定细胞的放射敏感性;CCK-8细胞增殖实验检测增殖情况,流式细胞术检测凋亡及周期变化,彗星实验及5-乙基-2′-脱氧尿苷(EdU)掺入检测DNA的修复能力.结果 Hela-R细胞株的平均致死剂量显著高于Hela细胞株.X射线照射后,Hela-R细胞株早、晚期凋亡率均低于 Hela细胞.24、48、72 h Hela和Hela-R细胞株的光密度值(OD)值分别为1.13±0.12、1.46±0.13(P<0.05);1.34±0.07、1.20±0.07(P<0.05); 1.58±0.07、1.48±0.07(P<0.05).Hela-R细胞株放疗后12～48 h G2期细胞显著增多.Hela-R细胞株放疗后24 h与48 h,彗星尾长均短于Hela细胞株.X射线照射1 h后,Hela-R细胞株EdU荧光强度为121.32±39.67(P<0.01),高于Hela细胞株.结论 Hela-R较Hela细胞株具有显著的放射抗拒性,DNA损伤修复能力的增强是其产生的重要机制之一.
