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放射诱导的肿瘤特异性嵌合启动子研究
目的 将放射敏感性的CArG元件与肿瘤特异性的人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子相结合,构建新的嵌合启动子.方法 构建含不同CArG元件数量的嵌合hTERT启动子,在放射线诱导下(单剂量或分割照射),利用荧光素酶报告基因检测其在肿瘤细胞(HeLa、A549、MHCC97细胞)及正常细胞(hEL细胞)中的活性.结果 包含6个CArG元件的hTERT嵌合启动子较含其他数量CArG的嵌合启动子显示了更好的放射诱导性,并在4～6 Gy时达到顶峰,而构建的嵌合启动子在正常的hEL细胞中活性很低.在肿瘤细胞中,3次2 Gy与单次6 Gy剂量照射相比较,报告基因的表达相当.结论 包含6个CArG元件的肿瘤特异性嵌合启动子具备良好的放射诱导性,这种嵌合的启动子系统具有肿瘤基因治疗的潜力.
关键词： 人端粒酶反转录酶启动子 CArG元件 基因治疗 -
血清反应因子结合位点在小鼠及人基因组中保守性、多样性及进化的研究
目的:CArG元件因其为血清反应因子识别的结合位点近年来备受关注.然而迄今为止尚未见到有关CArG元件的序列特征及进化模式的研究.方法:本研究应用生物信息学方法结合遗传学方法对小鼠及人基因组中CArG元件的位置分布序列类型、多样性及保守性进行深入研究.结果:多样性研究结果显示,CArG元件的序列在小鼠及人类基因组存在大量的不同类型.但是,小鼠和人基因组中CArG元件的主要类型又存在明显差异.同源性分析结果表明人类和小鼠中的CArG元件存在两种进化历程,一部分CArG元件拥有共同的祖先,一部分是在物种分化以后突变产生的.结论:上述研究结果将为更为深入阐述SRF的调控模式奠定理论基础,同时为更清楚的阐释CArG元件序列变化对下游基因的表达影响提供理论支持.
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CArG调控元件辐射诱导活性的研究
目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性.方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMV IE basal gene promoter构成的嵌合调控元件插入到pGL3-Basic质粒,构建荧光素酶报告质粒.利用脂质体将该报告质粒瞬时转染肿瘤细胞株HeLa、A549、HepG2,给予不同剂量137Cs γ射线照射,36 h后检测荧光素酶活性,观察该调控序列的放射诱导活性.结果该CArG调控元件在低剂量放射线的诱导下能明显增强下游基因的表达,在3 Gy的γ射线照射下诱导活性强.结论人工合成的CArG调控元件在低剂量的放射线作用下能有效诱导下游基因的表达,在肿瘤的放射-基因治疗中具有较强的应用潜力.
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血管平滑肌细胞移行及表型转换的分子机制
在动脉粥样硬化发生、发展的不同阶段,血管平滑肌细胞表型转换具有重要且可能是不同的病理生理学意义.文章复习了近年动脉粥样硬化病损内膜中血管平滑肌细胞来源、血管平滑肌细胞表型转换的分子机制及鉴别不同平滑肌细胞表型的标志性分子,以期为深入理解动脉粥样硬化的发病机制和相关研究提供有益认识.
