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A549细胞线粒体DNA缺失模型建立及其放射敏感性变化
目的 建立肺癌A549细胞线粒体DNA(mtDNA)缺失模型(ρ0细胞),观察其放射敏感性变化.方法 用含微量溴化乙锭(EB)的特殊培养液持续培养正常的A549细胞(ρ+细胞)以获得mtDNA完全缺失的ρ0细胞,利用生长缺陷及PCR鉴定该细胞模型.利用克隆形成实验分别检测两种细胞的放射敏感性,利用碘化丙啶(PI)染色法及二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)染色法,分析两种细胞在6MVX射线照射后的细胞周期及活性氧簇(ROS)变化情况.结果 成功建立A549 ρ0细胞.ρ0细胞较ρ+细胞放射敏感性降低(t=12.57,P＜0.01).放射照射8 Gy后,ρ0细胞较ρ+细胞G2期阻滞时间延长,G2期细胞比例降低(t =6.82,P＜0.01),ρ0细胞ROS升高水平明显低于ρ+细胞(t=14.51,P＜0.01).结论 ρ0细胞较ρ+细胞放射敏感性降低,其机制可能与放射照射后ROS产量降低及G2期阻滞延长有关.
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阿尔茨海默病胞质杂交细胞的构建与其线粒体的结构功能变化
目的:探讨AD胞质杂交细胞的构建方法及其线粒体形态功能变化情况,为后续研究提供细胞模型.方法:利用融合剂将AD患者及健康老人血小板分别与线粒体DNA缺失细胞(ρ0细胞)进行融合,建立AD和对照细胞质杂交细胞,透射电镜及PCR法鉴定；透射电镜观察胞质杂交细胞线粒体结构；MTT检测细胞活力；荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:ρ0细胞与血小板融合后重新出现线粒体和mtDNA；与同期对照组胞质杂交细胞比较,到培养晚期,AD胞质杂交细胞中异常线粒体显著增多,细胞活力明显降低,ROS水平明显增高.结论:成功构建出AD胞质杂交细胞和对照组胞质杂交细胞,为下一步的研究奠定了细胞模型基础.
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线粒体DNA缺失对肿瘤细胞生物学表现的影响的研究进展
多种肿瘤细胞的线粒体DNA缺失细胞(ρ0细胞)被培养出来且被发现具有与亲代肿瘤细胞不同的生物学表现,提示线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)缺失可对肿瘤产生影响.然而mtDNA缺失对肿瘤发生发展的具体影响方面及其作用机制还需要进一步深入探讨.
