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原代肝细胞培养文献资料
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原代肝细胞培养技术研究现状及其新药研发中的应用
通过查阅近期有关文献,综述了国内外原代肝细胞分离、培养技术研究情况及其药代动力学与毒理学方面的应用.
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原代小鼠肝细胞培养方法的比较
目的:比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能,寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方.方法:采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞,糖原染色观察细胞纯度,在贴壁4h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO+EGF组)等3种不同的条件培养肝细胞.镜下观察肝细胞形态,用MTT法检测细胞活力,生化分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白蛋白水平.结果:成功分离小鼠原代肝细胞,肝细胞纯度达95％以上;原代肝细胞培养至96 h时,DMSO组仍能较好地维持细胞形态,基础培养基组的细胞活力比DMSO组和DMSO+EGF组分别降低了66.87％和67.16％(P＜0.05),且基础培养基组的LDH水平均高于DMSO组和DMSO+EGF组(P＜0.05).此外DMSO组在96 h时仍能维持较高水平的白蛋白分泌,比基础培养基组和DMSO+EGF组分别增加了185％和24.2％(P＜0.05).结论:小鼠原代肝细胞培养基中加入DMSO对于维持肝细胞的形态和功能有促进作用,本研究为体外原代肝细胞培养模型的建立和优化提供了实用的方法.
