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嵌套式PCR引物文献资料
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青岛市隐匿性乙型肝炎的分子流行病学调查研究
目的:由于国内目前尚无检测隐匿性乙型肝炎病毒(Occult Hepatitis B Virus;OHBV)感染的试剂盒且OHBV患者的特点是HBsAg阴性,血清中存在低水平的HBV DNA,用常规的检测方法不能检测出来;急需研制灵敏度高、特异性强的PCR方法,来探讨青岛市是否存在OHBV感染.方法 根据OHBV血清图谱的特点随机收集了OHBV可疑样本100份,采用试剂盒和酚/氯仿两种方法提取DNA,PCR扩增及其引物设计按Kanneko等的方法进行并进行了改进.结果 1.经改进的酚/氯仿法提取OHBV DNA优于试剂盒法.2.常规PCR引物组合109-588扩增,所有样品的109-588组合均无扩增产物;使用嵌套式PCR引物组合1763-1778-2017-2032进行扩增,33份样品出现了HBV特异性扩增带.3.在OHBV不同血清图谱样品中均检出OHBV DNA,总检出率为33%,其中anti-HBs+anti-HBc阳性组中OHBV DNA检出率高(43.33%);anti-Hbe+anti-HBc阳性组中OHBV DNA检出率低(18.18%).结论 酚/氯仿法提取OHBV DNA经改良,优于试剂盒法,常规PCR方法不能检测出OHBV DNA,而嵌套式PCR方法可达到诊断OHBV的目的.本实验首次在青岛运用自行设计的OHBV检测体系,在OHBV可疑人群中检测出OHBV DNA,为有针对性地管理OHBV传染源提供了可靠依据和检测方法.
