首页 > 文献资料
-
基于报告基因的雌激素受体α亚型配体筛选模型的建立和应用
目的建立基于报告基因的雌激素受体α亚型配体的筛选模型,用此模型对收集到的化合物进行筛选,以发现具有新结构的雌激素受体配体.方法构建诱导性表达载体并转染入ERα +HepG2细胞中,筛选报告基因CAT表达受雌二醇诱导的阳性克隆.采用ELISA法检测化合物对CAT表达的影响,体外细胞存活实验对化合物进行功能性检测.结果 ERα +HepG2细胞中CAT的表达受雌二醇的诱导并呈现剂量依赖关系.化合物三羟基二苯乙烯诱导CAT表达的大活性为雌二醇的1.75倍.结论利用此模型通过测定CAT基因的诱导表达水平可筛选得到新结构的雌激素受体配体.
-
基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立
目的 建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型,以期发现ERβ亚型激动剂.方法 构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive element,ERE)靶序列和报告基因的诱导性表达载体pTAL-ERE-SEAP,并将其转入人胚肾(HEK293)细胞中,筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)表达受雌二醇(17β-estradiol,E2)诱导的阳性克隆.选取相关核受体配体进行模型的特异性考察,同时考察模型的稳定性及时效量效关系,以及免疫细胞化学染色鉴定转染后ERβ的表达情况.利用此模型对本实验室样品库中的2 622个化合物进行筛选.结果 转染pTAL-ERE-SEAP的HEK293细胞中,SEAP报告基因的表达受E2的诱导并呈剂量与时间依赖关系,E2对阳性克隆细胞无增殖作用,本模型的Z'因子值为0.7,免疫细胞化学染色结果表明,转染后ERβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低.结论 利用此模型通过测定SEAP报告基因的诱导表达水平可筛选ERβ亚型激动剂.
