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藻蓝蛋白亚基脂质体制备及其光动力学抗肿瘤作用实验
本研究建立了藻蓝蛋白亚基脂质体的制备方法,检测其对肿瘤细胞转染及光动力杀伤作用(PDT)效果.采用薄膜水合一超声分散法制备藻蓝蛋白亚基脂质体,测定其粒径大小及分布,荧光显微镜观察藻蓝蛋白亚基(PCS)及其脂质体(PCS-lip)的细胞转染率,MTT法检测藻蓝蛋白亚基及其脂质体对肿瘤细胞光动力杀伤效果.结果显示脂质体的粒径为80～160nm,包封率为42.3%;在质量浓度为100μg·mL-1时,藻蓝蛋白亚基脂质体对小鼠肉瘤细胞S180转染率在2 h达到(18.5±0.8)%.4 h为(23.1±0.9)%,5～6 h转染率不再上升.肿瘤细胞光动力杀伤实验表明,在0～200μg·mL-1内,光照剂量为22 J·cm-2时,随着藻蓝蛋白亚基及其脂质体浓度的增加,对胃癌细胞BGC-823和S180的光敏作用也随之增强;在200μg·mL-1时PCS-lip对两种细胞生存率分别降低为(45±5.2)%和(36±5.5)%,PCS-lip-PDT组与PCS-PDT组对细胞生存率影响有显著性差异(P<0.05).研究结果表明,藻蓝蛋白亚基脂质体可很好地保持藻蓝蛋白亚基的生物活性,在相同蛋白浓度时藻蓝蛋白亚基脂质体比藻蓝蛋白亚基更快地转染进肿瘤细胞,药物作用的佳时间为4 h.在相同浓度及光照剂量的情况下,藻蓝蛋白亚基脂质体对肿瘤细胞的光动力学作用略强于藻蓝蛋白亚基.
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螺旋藻藻蓝蛋白亚基的提取和免疫活性研究
目的:探讨螺旋藻藻蓝蛋白亚基的提取和免疫活性.方法:低温破壁,离心获取上清,经粗纤维膜过滤后,采用SephadexG-50凝胶过滤提取藻蓝蛋白亚基,SDS-PAGE检测蛋白纯度和分子量,经红外光谱技术和紫外/可见光分光光度计扫描图谱,检测其在波长620 nm和280 nm处的吸光度,进一步观察提取物对小鼠脾脏淋巴细胞的作用.结果:低温水提和凝胶过滤层析提取1号和2号提取物,分别为墨绿色和蓝色水溶性室温储存性状稳定的干粉.1号和2号提取物SDS-PAGE检测均见一条分子量约17 kDa的蛋白条带.红外光谱技术扫描图谱可见在1600～1800 cm-1的波长范围,螺旋藻原粉在1656 cm-1处可见1个吸收峰,1号提取物在1655 cm-1、1633 cm-1、1594 cm-1处可见3个吸收峰,2号提取物在1631 cm-1和1602 cm-1处可见2个吸收峰,残渣在1658 cm-1处可见1个吸收峰.紫外/可见光分光光度计检测1号提取物在232.0 nm和617.0 nm波长处有吸收峰,2号提取物在263.5 nm和619.5 nm波长处有吸收峰,1号提取物纯度A620/A280为0.78,得率15%,2号提取物纯度A620/A280为0.85,得率20%.提取物能够促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖.结论:低温提取藻蓝蛋白亚基且具有增强免疫活性.
