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微小RNA155通过降低核转录因子κB表达减轻异烟肼致人肝细胞损伤
目的 探讨异烟肼(INH)致人肝细胞损伤中微小RNA155(miR-155)调控核转录因子κB(NF-κB)信号通路的作用机制.方法 培养人正常肝细胞HL-7702,加入INH成功建立肝细胞损伤模型后,向细胞内转染小干扰RNA(miR-155 mimics与miR-155 inhibitor).实验分为6组:对照组、模型组、过表达组(INH +miR-155 mimics)、mimics阴性对照组(mimics阴性对照)、敲减组(INH+miR-155 inhibitor)、inhibitor阴性对照组(inhibitor阴性对照).赖氏法检测各组细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肝细胞中miR-155、NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达水平.结果 对照组,模型组,过表达组,mimics阴性对照组,敲减组,inhibitor阴性对照组的ALT分别为(3.60±0.48),(9.63±0.27),(15.54±0.35),(3.95±0.69),(7.63±0.36),(4.33±0.19)U·L-1;AST分别为(6.97±0.18),(13.59 ±0.22),(18.53 ±0.26),(6.94 ±0.23),(10.79±0.20),(6.92±0.20)U·L-1;NF-κB mRNA分别为0.99±0.02,2.47±0.04,3.16±0.05,0.98±0.05,1.64±0.06,0.99±0.02;TNF-α mRNA分别为0.97±0.02,2.56±0.12,3.24±0.06,1.03±0.02,1.70±0.03,0.97±0.02;IL-6 mRNA分别为1.06±0.02,2.12±0.06,2.91±0.07,1.04±0.04,1.66±0.12,0.94±0.03,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 通过敲减miR-155可降低NF-κB的表达,从而减轻INH致人肝细胞损伤.
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miR-155/BACH1信号通路在三氧化二砷诱导肺腺癌细胞死亡中的机制研究
目的 探讨微小RNA 155(miR-155)、BTB和CNC同源蛋白1(BACH1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素氧合酶-1(HO-1)在三氧化二砷(ATO)诱导细胞死亡过程中的变化规律,以及miR-155和BACH1可能的调控关系,为增敏ATO治疗新靶点的发现奠定实验基础.方法 以不同浓度ATO处理肺腺癌A549细胞后,采用MTT实验检测细胞的存活率或死亡率,试剂盒检测细胞的总抗氧化能力,Westom blot检测BACH1、NQO1和HO-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155的表达水平.miR-155类似物(mimic)及其阴性对照转染对数期A549细胞,并设未转染组为对照,qRT-PCR检测miR-155表达水平后,以20 μmol/L ATO处理24 h,再进行MTT及Western blot检测.结果 10～ 100 μmol/L的ATO可降低细胞的存活率;与空白对照组相比,10、20 μmol/L的ATO可减弱细胞的总抗氧化能力,激活BACH1蛋白的表达,抑制miR 155以及NQO1和HO 1蛋白的表达;在转染miR-155 mimic后,20 μmol/L ATO处理后的A549细胞死亡率低于未转染组和转染阴性对照组,且ATO对BACH1蛋白的激活作用减弱,NQO1和HO-1蛋白表达则高于后两组(P＜0.05).结论 ATO可通过抑制miR-155的表达,激活BACH1蛋白,抑制NQO1和HO-1蛋白的表达,从而削弱细胞的总抗氧化能力,终诱导细胞死亡,提示miR-155和BACH1可作为ATO治疗肺癌过程中的增敏靶点.
关键词： 三氧化二砷 总抗氧化能力 BTB和CNC同源蛋白1 微小RNA 155
