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壁虎多肽混合物对肝癌SMMC7721细胞增殖及其自噬的影响
目的 研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌SMMC7721细胞自噬的影响.方法 取对数生长期细胞种板,用不同质量浓度的GPM(0,0.04,0.06,0.09,0.14,0.20,0.30,0.45 mg·mL-1)处理SMMC7721细胞24 h,通过噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,根据MTT结果,分别作为正常组(0)、低中高3个质量浓度(GPM:0.1,0.15,0.22 mg·mL-1)实验组,对照组(西罗莫司40μg·mL-1).经单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察不同质量浓度GPM对SMMC7721细胞自噬的影响;免疫组化法检测细胞内Beclin1及LC3表达的变化;免疫印迹法检测细胞自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白的表达.结果 GPM可抑制SMMC7721细胞的增殖,并具有质量浓度依赖性,作用24h后其IC50值为0.16mg·mL-1.GPM处理SMMC7721细胞6h后,在胞质中可见大量自噬小泡的形成,在显微镜下呈亮绿色荧光.正常组、对照组、低中高3个质量浓度实验组Beclin1阳性细胞数占总细胞数的百分比分别为(15.70±0.26)％,(63.47 ±0.54)％,(17.09 ±0.37)％,(70.66±0.56)％,(78.48±0.68)％;与正常组相比,对照组与中高2个质量浓度实验组差异有统计学意义(均P ＜0.05).这5组LC3-阳性细胞数占总细胞数的百分比分别为(35.84±0.36)％,(82.41 ±0.82)％,(60.83±0.61)％,(69.66±0.70)％,(74.61 ±0.75)％,与正常组相比,各组差异均具有统计学意义(均P＜0.05).这5组的Beclin1与β-actin灰度比值分别为(6.87±0.68)％,(11.26 ±0.87)％,(6.46±1.34)％,(11.58 ±0.95)％,(15.82±1.58)％;与正常组相比,对照组、中高2个质量浓度实验组差异有统计学意义(均P ＜0.05).这5组LC3-Ⅱ与β actin灰度比值分别为(26.70±0.41)％,(103.17 ±0.88)％,(30.29 ±0.52)％,(36.32±0.52)％,(64.34 ±0.48)％;与正常组相比,各组差异均具有统计学意义(均P＜0·05).结论 壁虎多肽混合物能够影响人肝癌SMMCT721细胞自噬现象的发生,可能通过诱导其自噬而使细胞死亡.
关键词： 壁虎多肽混合物 SMMC7721细胞 自噬 -
壁虎多肽混合物对HepG2细胞增殖及内质网应激途径的影响
目的 研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌HepG2细胞增殖及内质网应激途径的影响.方法 用不同浓度GPM (0,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.40,0.45 mg·mL-1)处理HepG2细胞24h.以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,根据MTT结果,将细胞分为空白组和低、中、高3个质量浓度(GPM:0.1,0.2,0.3mg·mL-1)实验组,对照组(氟尿嘧啶10 μg·mL-1).以Western blot法检测内质网应激相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 GPM可抑制HepG2细胞的增殖,并具有质量浓度依赖性,作用24,48,72h后,其IC50值分别为0.27,0.23,0.20 mg·mL-.正常组、对照组和低、中、高3个质量浓度实验组的双链RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(PERK)与GAPDH灰度比值分别为(4.31±0.81)×10-2,(8.92±0.91) ×10-2,(20.73±0.97) ×10-2,(24.04±0.95)×10-2,(11.65±1.67) ×10-2.这5组的GRP78与GAPDH灰度比值分别为(27.99±2.36)×10-2,(35.58±1.02)×10-2,(42.55±1.19)×10-2,(54.91±1.20)×10-2,(7.31±1.01)×10-2.这5组的ATF4与GAPDH灰度比值分别为(20.82±1.42)×10-2,(39.60±0.56)×10-2,(52.02±1.83)×10-2,(73.39±1.83)×10-2,(18.13±2.28)×10-2;这5组的CHOP与GAPDH灰度比值分别为(8.71±0.76)×10-2,(11.27±1.07)×10-2,(41.29±1.36)×10-2,(48.55±1.37)×10-2,(33.01 ±3.95)×10-2.这5组的多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)与GAPDH灰度比值分别为(13.06±2.88)×10-2,(36.79±2.10)×10-2,(58.72±1.53)×10-2,(67.61±1.68)×10-2,(34.88±2.02)×10-2.这5组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)与GAPDH灰度比值分别为(5.92±0.33)×10-2,(14.71±1.11)×10-2,(17.58±1.33)×10-2,(35.41±2.91)×10-2,(5.94±1.61)×10-2,与正常组相比,4个给药组的以上各项指标差异均有统计学意义(均P ＜0.05).提示GPM可能通过诱导HepG2细胞内质网应激从而诱导细胞凋亡.结论 GPM可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与诱导HepG2细胞内质网应激有关.
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壁虎多肽混合物对人食管癌EC109细胞生长的抑制作用
目的 研究壁虎多肽混合物(GPM)对人食管癌EC109细胞的生长抑制作用及其机制.方法 用MTT法检测GPM对细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察GPM对细胞形态的影响;免疫细胞化学技术检测细胞内Bcl-2、Caspase-3的表达.结果 GPM抑制了EC109细胞的生长,作用呈时间和剂量依赖性.GPM作用24 h,EC109细胞出现明显的凋亡,且 Bcl-2表达降低而Caspase-3表达增高.结论 GPM可以抑制人食管癌EC109细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与GPM降低食管癌EC109细胞Bcl-2表达而增加Caspase-3表达有关.
