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靶向下调上皮细胞黏附分子对结直肠癌干细胞功能及药物敏感性的影响
目的 研究靶向下调上皮细胞黏附分子(ECAM)对结直肠癌干细胞增殖、侵袭及药物敏感性的影响.方法 用肿瘤微球法从人结直肠癌细胞系LoVo中获取结直肠癌干细胞,用结直肠癌干细胞表面特殊标志物[ECAM和人类细胞分化抗原44(CD44)]对其进行鉴定并进行后续研究.用lipofectamine 2000脂质体介导完成转染,根据处理方法不同将细胞分为3组:实验组(ECAM抑制组),对照组(转染公共抑制剂lipofectamine 2000-抑制剂),空白组(不作任何处理),并进行培养,取3组对数期的细胞分别给予几个浓度(1,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50 mg·L-1)伊立替康和几个浓度(50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,550,600mg·L-1)卡培他滨,继续培养.用实时荧光定量检测用药前后3组细胞中ECAM mRNA的表达水平,用噻唑蓝(MTT)法检测用药前后3组细胞的增殖能力和药物敏感性,用Transwell小室检测3组细胞的侵袭能力.结果 在富集前后的LoVo细胞系中,EpCAM+ CD44+双阳结直肠癌干细胞的百分率分别是0.95％,85.78％,与富集前比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).空白组、对照组和实验组中EpCAM mRNA的表达水平分别为8.17±0.64,7.94±0.83,2.16±0.12,对照组和实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),说明3组细胞构建成功.空白组、对照组和实验组中侵袭细胞分别为79.22--5.25,80.12 ±4.89,31.23±2.36.对照组和实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).空白组、对照组与实验组的伊立替康对结直肠癌干细胞的IC50分别为(20.25±4.35),(19.22±3.99),(10.24±2.04) mg·L-1;这3组的卡培他滨对结直肠癌干细胞的IC50分别为(320.13±23.65),(315.79 ±21.03),(250.22±15.45)mg·L-1,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向下调ECAM可以有效地抑制结肠癌干细胞增殖及侵袭能力,同时增强其对药物的敏感性.
