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参苈加颗粒对慢性心力衰竭大鼠心肌巨噬细胞衍生趋化因子表达的影响
目的 筛选并分析参苈加颗粒调控慢性心力衰竭大鼠心肌巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)相关的微小RNA(micRNA)的作用.方法 Wistar大鼠腹腔注射阿霉素(按1.5 mg·kg-1腹腔注射,6周)复制心力衰竭大鼠模型.按照体重将成模大鼠随机分为实验组(给予参苈加颗粒,2.1 g·kg-1 d,4周)和模型组(给予等体积0.9％NaCl).用基因芯片分析MDC相关micRNA.以荧光定量-聚合酶链反应测定相关micRNA表达水平.结果 参苈加颗粒能够显著良性调控2组共相关的MDC差异表达micRNA共4个:miRNA-3593-3p、miRNA-6332、miRNA-1199-5p和miRNA-328-5p.4个micRNA差异表达真实存在,实验组、模型组与正常组的miRNA-3593-3p表达值分别为2.15±0.29,3.66±0.90,1.00±0.30;这3组的miRNA-6332表达值分别为2.54±1.34,3.64±0.90,1.00±0.35;这3组的miRNA-1199-5p表达值分别为1.16±0.24,2.72±1.05,1.00±0.30;这3组的miRNA-328-5p表达值分别为3.76±0.84,7.16±1.60,1.00±0.24,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 参苈加颗粒可能通过调节MDC相关micRNA的表达,对心力衰竭大鼠心脏起保护作用.
关键词： 微小RNA芯片 参苈加颗粒 心力衰竭大鼠 巨噬细胞衍生趋化因子 -
膝关节骨性关节炎患者关节液miRNAs表达变化及意义
目的 探讨膝关节骨性关节炎(KOA)患者关节液中差异表达的微小RNA (miRNAs)及其临床意义.方法 选择KOA患者和体检健康者各33例,均为女性.采集受试者关节液标本,随机从中各选择3例份,采用miRNA芯片技术检测差异表达的miRNAs(差异表达的标准定义为上调或下调≥2倍).采用Real-time PCR法检测剩余KOA患者和体检健康者关节液(各30例份)中差异表达miRNAs的相对表达量,对芯片检测结果进行验证.结果 与体检健康者比较,KOA患者关节液中上调≥2倍的miRNAs有3个(miR-9、miR-155、miR-98),下调≥2倍的miRNAs有4个(miR-140、miR-27a、miR-146a、miR-138).KOA患者关节液miR-9、miR-155、miR-98相对表达量均高于体检健康者,miR-140、miR-27a、miR-146a和miR-138相对表达量均低于体检健康者(P均＜0.05).结论 KOA患者关节液miR-9、miR-155、miR-98表达升高,miR-140、miR-27a、miR-146a和miR-138表达降低;上述miRNAs表达变化可能与KOA的发病有关.
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肺腺癌相关微小RNA的筛选及其功能研究
目的 筛选肺腺癌密切相关的微小RNA(miRNA,miR),为进一步研究其在肺腺癌发病机制中的作用奠定基础.方法 收集肺腺癌及相应癌旁组织各4例,抽取总RNA,利用miRNA芯片技术,检测4例肺腺癌及其相应癌旁组织中miRNA的表达;采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证miRNA芯片结果的可靠性;利用靶基因预测软件预测肺腺癌相关miRNA可能调控的靶基因,并初步分析其生物学功能.结果 相对于癌旁组织,肺腺癌标本中有hsa-miR-155、hsa-miR-21、hsa-miR-550、hsa-miR-939、hsa-miR-30c-1、hsa-miR-146b-3p、hsa-miR-223和hsa-miR-194等8个miRNAs表达显著上调,差异倍数分别为82.72、38.51、16.06、9.69、3.27、3.14、2.65、2.18.hsa-miR-145、hsa-miR-339-5p、hsa-miR-203和hsa-miR-205等4个miRNAs表达显著下调,差异倍数分别为15.12、10.28、5.17、3.78.结论 筛选得到的与肺腺癌关系密切的miRNA,可能在肺腺癌发生发展过程起重要的调控作用.
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大鼠骨髓来源树突状细胞成熟过程中微小RNA表达谱变化
目的 观察树突状细胞(DC)成熟过程中微小RNA (miRNA)表达谱的变化.方法 将大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(imDC)用脂多糖(LPS)刺激,分别于0、12、24 h后提取总RNA,进行miRNA芯片杂交,应用生物信息学方法进行miRNA表达谱数据分析.结果 与未受LPS刺激的imDC比较,刺激12 h之后的DC有54种miRNA的表达出现显著改变,其中44种miRNA表达下调2倍以上,10种表达上调2倍以上；与未刺激的imDC比较,刺激24 h之后的DC有92种miRNA的表达出现显著改变,其中52种miRNA表达下调2倍以上,40种表达上调2倍以上.挑选不同时相表达变化显著的19个miRNA做靶基因预测,发现同时被3个miRNA作用的靶基因有4个(WEE1、CHKA、CDC37L1、RGD1359108).结论 DC的成熟过程中,miRNA表达谱出现显著变化,推测其中某些 miRNA 在DC成熟过程中扮演重要角色.
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基于微小RNA表达谱的甲状腺髓样癌关键调节微小RNA筛选
目的 通过生物信息学分析观察40例甲状腺髓样癌患者的癌组织与癌旁组织的微小RNA(miRNAs,miR)表达谱变化,从而寻找疾病相关的重点miRNAs及其靶基因.方法 从GeneExpression Omnibus (GEO)中下载甲状腺髓样癌患者的基因表达数据表达芯片原始数据GSE40807.首先比较了两种样本的差异表达miRNA,利用数据库预测出差异表达miRNA的靶基因,随后分析了这些靶基因的功能及参与的代谢通路,并构建了靶基因之间的互作网络及靶基因与转录因子的调控网络.结果 与正常甲状腺比较,在甲状腺髓样癌中,有21个miRNAs表达发生了显著变化,其中18个miRNAs表达上调和3个miRNAs下调.利用11个预测靶基因数据库得到336个miRNA-靶基因关系对,对这些靶基因进行STRING蛋白互作网络分析,得到230个节点和491个关系对.此外对这些靶基因进行TF预测和调控网络构建,得到7个转录因子、156个节点和300个关系树.结论 通过生物信息方法系统分析了甲状腺髓样癌相关miRNA表达谱及相关靶基因,筛选到miR-124、miR-7和miR-129-5作为甲状腺髓样癌的相关调节因子.
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肺癌、癌旁组织及正常组织中微小RNA表达谱的检测
目的 探讨肺癌、癌旁及正常组织中微小RNA(miRNAs,miR)表达谱差异及其与TNM病理分期的关系.方法 采用Agilent miRNA芯片检测9例非小细胞肺癌患者的同体癌、癌旁和正常组织的miRNA表达谱,比较不同TNM分期间的表达差异.结果 筛选出36个在癌组织和癌旁组织之间差异表达的miRNAs和55个在癌组织和正常组织间差异表达的miRNAs;与早期患者比较,Ⅲa期的正常组织有hsa-miR-205、hsa-miR-34b等11个差异表达的miRNAs;而癌旁组织则从Ⅱa期开始就出现了9个差异表达的miRNAs;不同TNM分期的癌组织之间仅有hsv2-miR-H7-3p和hsa-miR-23a*表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 随着肺癌病理分级的发展,癌旁组织甚至远端组织也会出现特定mircoRNA表达量的变化,该特定mircoRNA的表达可能提示肿瘤的浸润能力.
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大鼠肝卵圆细胞向肝癌细胞分化过程中microRNA的变化
目的 利用生物芯片技术分析大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达变化,筛选调控分化的microRNAs,探讨肝癌发生的起源机制.方法 用化学致癌剂3’-Me-DAB诱发SD大鼠肝卵圆细胞增生,采用密度梯度离心法分离、纯化肝卵圆细胞,行体外培养使其恶性分化并进行鉴定.提取分化过程中的microRNA进行microRNA基因芯片杂交,获得卵原细胞恶性分化过程中microRNA表达谱.同时利用种植模型及大鼠Y染色体特异性PCR技术,验证卵圆细胞可恶性分化为肝癌细胞.结果 ①激光扫描共聚焦显微镜显示,肝卵圆细胞胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit;②通过基因微阵列分析,卵原细胞恶性分化过程中有22个miRNA的改变显著,其中19个表达上调,3个表达下调;③卵原细胞种植模型的大鼠肝癌组织具有SRY基因的电泳条带.结论 特定microRNA可能对大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程起到关键作用.
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原发性IgA肾病中微小RNA的差异表达研究
目的 借助微小RNA(microRNA,miRNA)芯片研究IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)中miRNA的差异表达. 方法 收集11例IgAN患者肾穿标本作为IgAN组,3例镜下病理检查止常的肾皮质作为对照组.使用Trizol试剂提取每组总RNA,分离miRNA,采用miRNA芯片筛选出差异表达显著的miRNA,荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术验证芯片结果的可靠性.结果 IgAN组中miRNA表达出现显著差异的有66个,其中表达显著上调35个,显著下调31个.挑选has-miR-637、has-miR-492进行Real-time PCR相埘定量检测,结果显示2个miRNA的表达趋势与芯片结果相符,证明了芯片结果的可靠性. 结论 IgAN是一种经典的多因素、多基因病,本实验通过芯片技术表明miRNA在IgAN中出现显著差异表达.
