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大鼠乙醛脱氢酶2基因调控腺病毒载体构建方法及意义
目的：观察持续活化突变体腺病毒转染大鼠心肌细胞的转染效果及对乙醛脱氢酶2（ALDH2）表达的影响。方法分别将扩增得到的 ALDH2持续活化突变体基因及合成 ALDH2-siRNA 序列颈环状 DNA，连接相应载体后，得到重组穿梭质粒；对2种穿梭质粒分别进行扩增和酶切鉴定，并导入 pAdeno 腺病毒载体，转染293细胞进行扩增与纯化。将1日龄雄性 SD 大鼠心肌细胞进行培养，将2种重组腺病毒及对照空载体分别感染细胞，随后检测 ALDH2表达量。结果2种载体构建正确，纯化后两者滴度分别为2×1010，1．6×1010 PFU? mL-1。实验组 ALDH2表达量与对照组相比差异具有统计学意义（P ＜0．01）。结论成功构建大鼠 ALDH2基因双向调控腺病毒载体，可以有效调控离体大鼠心肌细胞 ALDH2表达。
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急性高血糖通过抑制 ALDH2活性加重大鼠心肌缺血／再灌注损伤
目的：探讨乙醛脱氢酶2（ALDH2）在急性高血糖加重大鼠心肌缺血／再灌注（I／R）损伤中的活性变化及作用。方法48只雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术组（SHAM 组）、盐水对照组（CON 组）、高糖组（HG 组）和高糖＋Alda-1干预组（HG ＋Alda-1组），每组12只。采用左冠脉前降支（LAD）结扎缺血30 min，再灌注1 h，建立大鼠心肌 I／R 模型。在建立大鼠心肌 I／R 模型同时，经颈静脉给予首负荷剂量50％葡萄糖（3 g ／kg），使大鼠血糖浓度迅速升高至20～28 mmol／L，持续微量泵入[4 mL／（kg·h）]，使大鼠血糖浓度维持在20～28 mmol／L，至再灌注结束。SHAM 组和 CON 组给予0．9％NaCl（6 mL／kg）。HG ＋Alda-1组给予 Alda-1（8．5 mg ／kg）微量泵入，至再灌注结束。再灌注结束后取心脏，采用比色法检测 ALDH2活性的变化，HE 染色观察心肌组织形态学变化，TTC 染色法检测心肌梗死面积，TUNEL 法检测心肌细胞凋亡情况。结果与 CON 组相比，HG 组在缺血期和再灌注期血糖浓度明显升高[（23．4±0．21）vs （5．8±0．21）mmol／L，P ＜0．01]。HG 组 ALDH2活性明显低于 CON 组[（69．1±5．16）％ vs （87．0±4．30）％，P ＜0．05]。HG 组心肌梗死面积明显高于 CON 组[（38．2±3．30）％ vs （26．8±2．53）％，P ＜0．05]；HG ＋Alda-1组心肌梗死面积明显低于 HG 组[（27．8±2．50）％ vs （38．2±3．30）％，P ＜0．05]。HG 组心肌细胞凋亡指数明显高于 CON 组[（16．1±0．83）％ vs （13．1±0．39）％，P ＜0．05]；HG ＋Alda-1组心肌细胞凋亡指数明显低于 HG 组[（13．6±0．51）％ vs （16．1±0．83）％，P ＜0．05]。结论急性高血糖可加重 I／R 大鼠的心肌梗死面积及心肌细胞凋亡，使心肌 ALDH2的活性降低；增强 ALDH2活性可显著减少急性高血糖大鼠 I／R 后的心肌梗死面积及心肌细胞凋亡。
