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1型肺炎球菌多糖竞争ELISA检测方法的建立
目的:建立竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),测定1型肺炎球菌多糖浓度.方法:以1型肺炎球菌多糖为包被抗原,待测多糖为竞争抗原,与优化的抗1型肺炎球菌多糖抗体反应,建立标准曲线,并验证该方法的特异性、准确性和精密度.结果:优化后的1型肺炎球菌多糖包被浓度为1500 ng·mL-1,抗多糖血清稀释度为1:100K.检测线性范围23～1 500 ng· mL-1,低检测限为12 ng·mL-1,回归方程为B/B0=-0.31 lg[PS1] +1.30,线性相关系数为R2=0.99.批内和批间精密度分别为6.5％和8.8％,测定培养基中标准1型多糖的回收率为98.2％.结论:本研究建立的竞争ELISA方法,特异性、准确型和精密性均较好,可以特异性地检测1型肺炎球菌多糖浓度.
关键词： 1型肺炎球菌多糖 免疫学检测法 竞争酶联免疫吸附分析法 多糖浓度 硫酸蒽酮法 -
改进的蒽酮法检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中多糖浓度
目的 改进检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中多糖浓度的蒽酮法.方法 分别对蒽酮法中蒽酮的浓度和处理温度进行优化,并对改进的方法进行验证和重复性检测.结果 适宜的葸酮浓度为0.3 g/300 ml,处理温度为40%,在检测肺炎链球菌多糖结合物原液中的多糖浓度时,标准曲线回归系数高,方法稳定,重现性好.结论 改进的蒽酮法可以有效、准确、稳定地检测肺炎链球菌结合物多糖原液中的多糖浓度.
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肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA 法建立及其在多糖浓度测定中的应用
目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体，并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA），用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周，获得高滴度的抗多糖血清，经过亲和层析纯化，获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体，加入多糖样品，再以生物素化的抗体作为检测抗体，建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的佳线性范围，并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32；该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL；低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基，回收率分别为102％和108％；该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法，其特异性、准确性和精密度均良好，可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。
