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简单节杆菌催化甾体化合物C1,2位脱氢规律的研究
目的:研究不同基团的甾体底物在不同反应体系中的生物脱氢规律及细胞壁、细胞膜对生物转化的影响.方法:将研究底物置于4种不同的反应体系中,即采用普通直接转化、双液相转化、破碎细胞转化和原生质体转化方法,测定各甾体的熔点、比旋度、吸光系数等理化性质,并通过非线性拟合方法建立了甾体化合物C1,2位脱氢转化率与其理化性质之间变化规律的数学模型.结果和结论:保证细胞的完整性对1,2,位脱氢转化至关重要;甾体底物在普通直接转化中,脱氢转化率按由高到底排列依次是醋酸可的松、普氏脱溴物、醋酸氢化可的松、甲睾酮、睾丸素、4-雄烯二酮和可的松,RSA不转化;4种反应体系按其甾体化合物转化率高低的排序依次是普通直接转化、双液相转化、破碎细胞转化和原生质体转化(醋酸氢化可的松除外).在同一种反应体系中,数学模型显示不同底物的熔点和吸光系数对其转化率有着正向促进作用,而比旋度对其转化率具有负向抑制作用.
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有益芽胞杆菌受体菌研究
采用酸性茚三酮法测定了30株有益芽胞杆菌的赖氨酸产量，然后在不同的溶菌酶浓度下，对赖氨酸产量超过0.07g/L的21株菌进行原生质体转化质粒pUB110,测定原生质体形成率、原生质体再生率及转化频率，结果6103，6104，6120，6129四株菌的转化频率较高。然后，采用经典遗传学方法选育AEC抗性突变株，使赖氨酸积累提高。其中，B. licheniformis 6104诱变菌株610401能积累赖氨酸2.91 g/L，比出发菌株提高了17倍左右，转化率也提高了一个数量级。通过质粒的再转化试验及传代稳定性试验，进一步证实B.licheniformis 6104及其突变菌株610401是较好的受体菌，尤其是用于赖氨酸合成酶基因的表达。
