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dl-扁桃酸对精子质膜及顶体的完整性和线粒体膜电位的影响
目的:研究dl-扁桃酸(dl-mandelic acid)的抑精作用及其机制.方法:dl-扁桃酸0.5 ～10.0g·L-1处理高活力精子20 s,计算机辅助精子分析仪(computer assistant spermanalysis,CASA)测定精子活率、精子直线运动速率(VSL)、曲线运动速率(VCL)、平均路径速率(VAP)、侧摆幅度(ALH)、精子运动向前性(STR)和精子运动直线性(LIN);流式细胞(SYBR-14/PI)检测精子质膜完整性,采用FITC标记的豌豆凝集素荧光染色观察精子顶体完整性;FITC-PSA/PI/JC-1荧光染色检测精子线粒体膜电位变化.结果:随着dl-扁桃酸浓度的升高,精子活率与精子直线运动速率(VSL)、曲线运动速率(VCL)、平均路径速率(VAP)、侧摆幅度(ALH)、精子运动向前性(STR)和精子运动直线性(LIN)显著降低,dl-扁桃酸抑制精子活率的半数有效浓度(EC50)约为1.25 g·L-1,低有效浓度(MEC)约为2.5 g·L-1.流式细胞仪检测表明,dl-扁桃酸对精子质膜完整性无影响.荧光染色检测表明,dl-扁桃酸处理组精子顶体受损,精子线粒体膜电位降低.结论:dl-扁桃酸通过影响精子顶体和降低线粒体膜电位,对精子起到抑制作用.
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dl-扁桃酸对人精子与阴道黏膜上皮VK2/E6E7细胞的毒性研究
目的 探讨dl-扁桃酸对人阴道黏膜上皮细胞(VK2/E6E7)与精子的细胞毒性损伤.方法 不同浓度的dl-扁桃酸处理高活力精子20 s,计算机辅助精子分析仪测定精子活率,扫描电子显微镜检测精子受损情况.1.25,2.5 g·L-1 dl-扁桃酸和4.0 g·L-1壬苯醇醚(nonoxyno1-9,N-9)处理VK2/E6E7细胞,MTT法检测细胞活性,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,并用流式细胞法检测细胞凋亡率.结果 dl-扁桃酸抑制精子活率的半数有效浓度约为1.25 g·L-1,低有效浓度约为2.5 g·L-1.扫描电镜结果显示,dl-扁桃酸处理组精子表面结构与对照组形态相似,无明显受损特征,N-9组精子严重受损.MTT实验结果表明,1.25 g·L-1dl-扁桃酸组细胞存活率＞95％,2.5 g·L-1 al-扁桃酸组细胞存活率约为50％.1.25,2.5 g·L-1 dl-扁桃酸处理组LDH释放量只有微量检出,远低于N-9组.流式细胞检测表明,1.25,2.5 g·L-1 dl-扁桃酸处理组中活细胞和晚期凋亡比例与对照组相近,早期凋亡细胞略少于对照组,死亡细胞稍多于对照组,N-9组大量细胞死亡.结论 dl-扁桃酸对VK2/E6E7细胞毒性远低于N-9,其对精子的抑制作用不是通过破坏精子质膜与鞭毛来实现.
关键词： dl-扁桃酸 壬苯醇醚 VK2/E6E7细胞 细胞毒性 -
dl-扁桃酸热敏凝胶对兔阴道黏膜炎症反应的研究
目的 探讨dl-扁桃酸热敏凝胶(dl-mandelic acid thermosensitive in situ gel,MA Gel)对兔阴道黏膜的刺激性及炎症反应情况.方法 将40只雌兔随机分为基质对照组、MA Gel低剂量组(10g/L)、MA Gel中剂量组(20 g/L)、MA Gel高剂量组(40 g/L)和市售壬苯醇醚凝胶(nonoxynol 9,N-9 Gel)组,每组8只,阴道给药2.5 mL,qd,连续10d.在给药前、给药第4日以及末次给药后24 h与72 h,收集基质对照组、MA Gel高剂量组和N-9 Gel组阴道灌流(cervicovaginal lavage,CVL)液,流式细胞仪计数CVL中炎性细胞和中性粒细胞数目,并对CD45+细胞进行分析.取阴道组织做组织病理切片,免疫组织化学检测阴道黏膜内CD45的表达.结果 MA Gel高剂量组CVL液中炎性细胞、中性粒细胞以及CD45+ 细胞数目显著低于N-9 Gel组(P=0.036).MA Gel各剂量组与基质对照组相比,阴道黏膜CD45+表达无显著上升,主要表达在黏膜上皮层.结论 dl-扁桃酸热敏凝胶仅引起家兔阴道黏膜较轻微的炎症反应,未诱导局部炎性细胞的明显活化,安全性较好,具有研发成为阴道外用避孕药的前景.
