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一种新型微孔底膜插入式培养皿的制作方法
目的探讨一种新型微孔底膜插入式培养皿的制作方法, 为进行体外细胞共培养提供技术支持.方法利用塑料离心管, 微孔滤膜为材料制备微孔底膜插入式培养皿; 在该插入式培养皿中接种大鼠脑微血管内皮细胞 (brain capillary endothelial cells, BCECs)(在星形胶质细胞条件培养液影响下), 以跨内皮细胞阻抗(trans-endothelial electronic resistance, TEER)为指标对该插入式培养皿进行评价.结果该插入式培养皿在培养条件下(未接种细胞)15 天内未出现破损; 共培养条件下TEER增幅明显:由(66.1±13.3) Ωcm2升至(182.2±6.7) Ωcm2.结论该微孔底膜插入式培养皿制作简便, 脑微血管内皮细胞在上生长良好, 并具有可调节性和可重复使用的特点, 是一种可用于体外细胞共培养相关研究工作有效的工具.
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共培养条件下大脑皮层神经元诱导肌源性干细胞成神经元样细胞
目的:研究使用共培养系统将肌源性干细胞(MDSCs)诱导为神经元样细胞的可行性及机制.方法:分离新生SD大鼠的MDSCs及皮层神经元,以叔丁基过氧化氢(终浓度为200μmol/L)损伤神经元,构建氧化应激损伤的神经元模型.当MDSCs差速贴壁至第5代时,将其随机分为MDSCs和损伤的神经元置于共培养系统中培养(损伤组)、MDSCs和正常神经元共培养(未损伤组)以及MDSCs置于共培养系统中单独培养(MDSCs组),培养7d后用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学法鉴定诱导的结果,并用大鼠脑源性神经营养因子(BDNF) ELISA试剂盒检测不同时间点各组培养液中该因子的分泌情况.结果:共培养7d后检测到损伤组与未损伤组均有部分MDSCs分化为表达NSE的神经元样细胞,前者分化率高于后者,MDSCs组未见有细胞分化为神经元样细胞.第2天损伤组BDNF的分泌量高于未损伤组,同时,损伤组第2天BDNF的分泌量高于第4天和第6天的分泌量.在不同时间点损伤组与未损伤组培养液中BDNF的分泌量均高于MDSCs组.结论:在共培养条件下,大鼠皮层神经元可诱导MDSCs为神经元样细胞,这与神经元分泌的BDNF有着重要联系,MDSCs也可分泌BDNF.
