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apo-t-PA基因文献资料
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生物技术减毒沙门氏菌介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达和在卵黄中沉积的研究
目的 探讨以减毒沙门氏菌为载体携带目的基因在家禽体内表达,并实现表达产物在卵黄中定向沉积的可行性.方法 将人t-PA基因与鸡VLDLy组装前体apo基因融合,构建pApo-tPA-GFP,表达质粒,电转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌△crpSL1344中,阳性重组菌静脉注射高产蛋鸡,收集不同时期鸡蛋,涂片荧光镜检和FLISA检测表达产物在卵黄中沉积情况和表达水平,平板溶圈法检测卵黄中表达产物的活性.结果 注射表达质粒第8天开始卵黄中有荧光颗粒出现,第21天表达量高,为10.4μg·mL-1,活性相当于5O·2μg·mL-1杯准品t-PA.结论 研究表明,减毒沙度氏菌能够介导apo-t-PA-GFP融合基因在鸡体内表达,且apo载脂蛋白能够引导t-PA透过卵黄膜实现在卵黄中沉积,这一途径简捷、方便,为外源基因在动物体内的表达研究提供了理论和技术基础.
关键词： 减毒鼠伤寒沙门氏菌 apo-t-PA基因 卵黄
