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丙戊酸钠抑制肺癌细胞H1299增殖与上调p21表达
目的 通过研究丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对体外培养的肺癌细胞株H1299细胞增殖、凋亡和细胞周期分布以及p21表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度(0、100、200、400、600、800 μmol·L-1)丙戊酸钠处理人肺癌细胞株H1299不同时间(24、48、72 h)后,四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期与细胞凋亡的改变,荧光定量聚合酶链反应分析p21 mRNA表达,Western blot分析p21蛋白表达.结果 丙戊酸钠能抑制肺癌细胞株H1299的增殖,使细胞阻滞于G1/G0期,诱导细胞凋亡.这些作用具有一定浓度和时间依赖性.丙戊酸钠能上调H1299细胞的p21表达.结论 丙戊酸钠通过阻滞细胞周期及诱导凋亡发挥体外抑制肺癌H1299细胞生长作用,其机制可能与上调p21表达有关.
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三基序蛋白25过表达对肺癌细胞H1299顺铂敏感性的影响
目的:初步探讨三基序蛋白25 (tripartite motif containing 25,TRIM25)过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制.方法:应用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体,瞬时转染人肺癌细胞株H1299,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)蛋白水平的变化.用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24h,MTT法检测细胞耐药性,Annexin V/PI双染法流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡.结果:同H1299空白组和转染pGCMV/neo空载体组比较,pGCMV-trim25转染组细胞中TRIM25蛋白的表达水平明显增加(P=0.003,P=0.005);且TRIM25过表达时,细胞中PKM2蛋白的表达水平降低(P=0.001,P=0.003).用顺铂处理后,pGCMV-trim25转染组细胞的药物敏感性显著下降(P＜0.001),转染组细胞凋亡率亦明显降低(P＜0.001).结论:TRIM25在肺癌细胞H1299中高表达时,可能通过下调PKM2而降低对顺铂的敏感性.
