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应用酵母双杂交系统筛选新基因AngRem104相关蛋白
目的:应用酵母双杂交系统筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,为该基因的功能研究提供线索.方法:构建AngRem104的真核表达载体AngRem104-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Western blot证实蛋白表达, 进行毒性和自激活检验,与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互作用的蛋白.结果: AngRem104蛋白能在酵母中正常表达,对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象. 筛选出的蛋白包括真核翻译延伸因子1α1、糖皮质激素受体AF-1特异延伸因子、β2-微球蛋白、巴戴-比德尔综合征2蛋白及4个与细胞代谢有关的蛋白.结论:AngRem104可能影响细胞内某些转录因子活性和细胞代谢,并与某些免疫相关疾病和遗传病发病有关.酵母双杂交结果为AngRem104的功能研究提供了重要线索.
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采用基因表达谱芯片技术筛选新基因AngRem104的功能相关基因
目的采用基因芯片技术来筛选新基因AngRem104的功能相关基因,为进一步的基因功能研究提供线索.方法建立新基因AngRem104的正义和反义表达的系膜细胞模型,应用含有4 000个人类基因的cDNA表达谱芯片,对过量表达AngRem104基因和抑制表达AngRem104基因的人肾小球系膜细胞RNA表达进行检测.部分基因的差异表达由RT-PCR方法来验证.结果筛选出的差异表达基因共96个,其中94个基因上调表达,2个基因下调表达.差异表达的基因涉及到细胞外基质和受体蛋白、细胞信号传导相关基因、DNA结合及转录相关蛋白、免疫相关蛋白、细胞骨架和动力蛋白和细胞合成及代谢相关蛋白等.特别是纤连蛋白(FN)及整合素β1(interin β1)表达明显上调.RT-PCR的方法也证实了AngRem104与FN表达的相关性.结论应用作为研究基因功能有效手段的基因表达谱芯片技术来筛选新基因AngRem104的功能相关基因,发现AngRem104与FN的表达有关,为其功能研究提供了重要线索.
