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羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究
目的：研究羟基红花黄色素 A（HSYA）抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞 LS180上清液和人脐静脉内皮细胞 ECV304体外共培养模型，通过实时荧光定量 PCR 检测 ECV304细胞中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（KDR）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及其受体（bFGFR）、HSPG2、p53、c-myc mRNA 水平的表达；ELISA 法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR（KDR）、bFGF、bFGFR 蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中，0．66、0．33 mg／L浓度的 HSYA 对血管生成促进因子 VEGF 及其受体 KDR、bFGF 及其受体 bFGFR 和癌基因 c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖 HSPG2的 mRNA 表达具有抑制作用；对抑癌基因 p53 mRNA 的表达具有促进作用。0．66、0．33 mg／L 浓度的 HSYA 对血管生成促进因子 VEGF 及其受体 KDR、bFGF 及其受体 bFGFR 的蛋白表达具有抑制作用。结论HSYA 抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖，其可能的作用机理是通过调控 VEGF 及其受体、bFGF 及其受体、HSPG2、c-myc 和野生型 p53的表达发挥抗肿瘤作用，揭示 HSYA 可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。
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HPLC法测定蒙药额力根乌日乐中羟基红花黄色素A的含量
目的：建立额力根乌日乐含量测定方法。方法应用反相 HPlc 法。结果本制剂中羟基红花黄色素 a 在0.0336～0.2016mg/ml浓度范围内面积与浓度呈良好的线性关系（r=0.9999）；加样回收率为98.20%，rsd为0.59%（n=6）。结论该方法具有简便、准确、灵敏度高等特点，可作为本品的质控方法。
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HPLC测定蒙成药檀香清肺二十味丸中羟基红花黄色素A的含量
檀香清肺二十味丸收载在中华人民共和国部颁标准蒙药分册中[1],是由檀香、红花、木香、降香、栀子等20味中药材组成,具有清肺止咳的功效,可用于肺热咳嗽,痰中带血,胸痛等症.因为内蒙地区是此类病的高发地,檀香清肺二十味丸对这类病有较好的治疗作用,因此该药在临床上广泛应用.由于檀香清肺二十味丸的质量标准中没有定性定量的内容,该药的质量不能得到有效的控制.本实验对君药红花[2]建立了含量测定的方法,采用的方法是HPLC[3].实验研究内容如下.
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红花中羟基红花黄色素A的提取动力学研究
目的：确定羟基红花黄色素 A 的佳提取工艺，并确立能够表征羟基红花黄色素 A 提取过程的动力学方程。方法以高效液相法测定不同温度、不同时间提取液中羟基红花黄色素 A 的含量，以 Fick 第一扩散定律为基础，建立浸提动力学方程，计算提取的速率常数、活化能等函数值。结果佳提取工艺为加适量水，在90℃温浸提取60 min，拟合的动力学方程为lnk ＝－3263．3（1／T）＋6．5244，该模型能较好地描述红花中羟基红花黄色素 A 提取的动态过程，活化能为27．13 kJ·mol －1。结论红花中羟基红花黄色素 A 提取过程的动力学符合一级动力学方程特征。
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HPLC 法测定复方当归注射液中两种成分的含量
目的：建立同时测定复方当归注射液中羟基红花黄色素 A 和阿魏酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为 Inertsil ODS -3（4.6 mm ×250 mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液（35∶65，V/ V），流速为1.0 mL·min -1，检测波长为403 nm（0～10 min，羟基红花黄色素 A）、321 nm（10～20 min，阿魏酸），柱温为35℃，进样量为10μL。结果羟基红花黄色素 A、阿魏酸的进样量分别在0.0426～1.7060、0.0112～0.4480μg（r＝1.000）范围内与相应峰面积呈良好的线性关系；二者精密度、稳定性、重复性试验的 RSD 均＜2.0％；平均加样回收率分别为99.76％、100.50％，RSD 分别为1.35％、1.19％（n ＝9）。结论本法简便、快速、重复性好，可用于复方当归注射液的质量控制。
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HPLC法测定“额力根一号”中羟基红花黄色素A的含量
目的：测定额力根一号中羟基红花黄色素 A 的含量。方法：采用 HPLC 法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇－乙腈－0.7％磷酸溶液（26∶2∶72），检测波长为403nm，流速为1.0mL／min。结果：羟基红花黄色素 A 在0.3762～3.7620μg （r ＝0.99991）范围内呈良好的线性关系。羟基红花黄色素 A 平均加样回收率为97.3％。结论：该方法简便、灵敏，可用于制剂的质量控制。
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参花胶囊的 HPLC 指纹图谱研究及4种成分含量测定
目的：研究建立参花胶囊的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱分析方法，并测定该制剂中的绿原酸、羟基红花黄色素 A 、迷迭香酸、丹酚酸 B 的含量，为其质量控制提供依据。方法用 HPLC 法，采用 Kromasil C18色谱柱（250 mm ×4．6 mm ，5μm）；用乙腈-5．0 g ? L -1磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱；以254 nm 为检测波长。在参花胶囊样品的 HPLC 图中，以迷迭香酸为对照参比物，对各共有色谱峰与迷迭香酸色谱峰的相对保留时间与相对峰面积比值的 RSD 值进行分析，用中药色谱指纹图谱对10批参花胶囊进行相似度评价。采用外标法，以320 nm 为检测波长，运用绿原酸、羟基红花黄色素 A 、迷迭香酸、丹酚酸 B 的混合对照品测定其在10批该制剂中的含量。结果在选定的条件下确定39个峰构成参花胶囊的指纹特征，各批次样品均具有上述特征，且特征峰的相对含量分布基本一致；各批次样品中迷迭香酸色谱峰所对应的保留时间一致；每批样品的各色谱峰与迷迭香酸色谱峰的相对峰面积和相对保留时间的比值 RSD 均符合中药指纹图谱的相关要求，10个批次样品的指纹图谱相似度均大于0．966，4种物质在10批该制剂中的含量基本一致。结论 HPLC 指纹图谱方法与4种物质的含量测定方法准确、稳定、简便，均可用于参花胶囊的质量控制。
