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电针对控制性超排卵小鼠子宫内膜磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达及其信号转导通路的调控
目的 观察电针对控制性超排卵(COH)小鼠子宫内膜胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)表达及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、磷酯酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)信号转导通路的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制.方法 将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组(其中BMS-536924、LY-294002、PD-98059为IGF-1R、PI3K、MAPK阻断剂的名称),每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠.采用控制性超促排卵长方案制备动物模型,并于注射绒毛膜促性腺素(HCG)日取关元、中极、三阴交行电针治疗,1次/d,至取材停止针刺.取供体鼠受精卵体外培养后移植至同组同日见阴栓的受体鼠子宫内,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,用Western blot法检测子宫内膜IGF-1R、磷酸化胰岛素样生长因子-1受体(p-IGF-1R)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1R、p-IGF-1R、p-Akt、p-ERK1/2的表达均较自然周期组低(P<0.05或0.01),电针组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组各项指标均较COH组显著性增加(P<0.05或0.01),但电针+BMS-536924组妊娠率、平均着床位点数未见明显改善,且p-IGF-1R表达显著性低于自然周期组(P< 0.01).电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组相比较,电针+PD-98059组p-Akt蛋白和电针+LY-294002组p-ERK1/2蛋白表达较高,其差异具有统计学意义(P< 0.01).结论 电针改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R表达及PI3K/Akt、MAPK/ERK1/2信号转导通路有关.
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叶下红对实验性肝脂肪变大鼠的保护作用及其分子机制
目的：探讨叶下红对实验性肝脂肪变大鼠的保护作用及其分子机制。方法将70只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、高或低剂量叶下红组及高剂量叶下红+磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（pERK1/2）抑制剂（PD98059）组（PD组）。正常对照组予以普通饲料；其余各组予以高脂低蛋白饲料联合30%四氯化碳（CCl4）花生油2 mL/kg每3 d皮下注射1次，连续3周制备动物模型。制模后叶下红组以高、低剂量叶下红提取物（5.0 g/kg和2.5 g/kg）灌胃，每日1次；PD组每日1次灌胃5.0 g/kg叶下红提取物后加用0.3 mg/kg PD98059每周1次尾静脉注射。3周后均改为普通饲料，第5周末取肝组织进行病理学观察；用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，采用免疫组化染色、蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）及流式细胞术检测固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1）、pERK1/2、Toll样受体4（TLR4）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）阳性细胞计数及蛋白表达；用羟胺法及硫代巴比妥酸（TBA）法检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。结果高、低剂量叶下红组及PD组肝组织小叶炎症较模型组减轻（分：1.50±0.53、1.80±0.43、1.20±0.42比2.30±0.48），ALT、AST、TC、TG、SREBP-1、MDA均较模型组减少，以高剂量叶下红组为明显〔ALT（U/L）为51.91±6.95比66.50±12.15，AST （U/L）为125.70±5.62比147.10±10.52，TC（mmol/L）为1.79±1.04比2.81±1.08，TG（mmol/L）为0.87±0.55比1.17±0.67，SREBP-1为（30.60±5.56）%比（53.10±5.02）%，MDA（nmol/mg）为5.20±0.87比10.61±5.45， P＜0.05或P＜0.01〕；pERK1/2、TLR4、HMGB1相对表达量与模型组比较差异无统计学意义〔pERK1/2为（43.77±4.93）%比（46.83±5.27）%，TLR4（相对荧光强度）为69.12±24.64比69.08±24.32，HMGB1（相对荧光强度）为22.93±14.88比33.17±13.29，均P＞0.05〕；而PD组上述各指标值与高剂量叶下红组接近，说明细胞外调节蛋白激酶（MEK）抑制剂对叶下红作用无影响。结论叶下红能减轻实验性肝脂肪变肝损伤程度，明显减轻肝小叶炎症，其机制可能与减轻氧化应激反应有关，SREBP-1可能参与其作用的发挥。
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鼻咽癌组织中 ERK1／2、p-ERK1／2和 MMP-9蛋白的表达变化及其相关性
目的：观察细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及相关性，并探讨其意义。方法采用免疫组织化学染色SP法检测75份NPC组织（ NPC组）和27份鼻咽黏膜慢性炎组织（炎性组）中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白的表达，分析三者在NPC组织中表达的相关性。结果 NPC组ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白阳性表达率均显著高于炎性组（P均＜0．01），χ2值依次为19．8、17．1、21．3；NPC组织中ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白三者间的表达呈正相关（P均＜0．01），其中ERK1/2与p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值分别为0．58、0．34，p-ERK1/2、MMP-9蛋白的r值为0．34。结论 ERK1/2、p-ERK1/2和MMP-9蛋白在NPC组织中呈高表达且三者间呈正相关，p-ERK1/2可能通过调节MMP-9表达参与NPC侵袭、转移。
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胰腺癌组织中Beclin-1mRNA和miR-216a的表达及VEGF蛋白表达与p-MAPK-ERK1/2信号通路的关系
目的 探讨腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中胰腺癌相关基因的表达.方法 回顾性收集2012年1月至2017年4月期间于湖北医药学院附属东风医院肝胆胰外科住院行手术治疗的40例胰腺疾病患者的术中标本,其中腺癌、鳞癌、黏液性囊腺瘤、慢性胰腺炎和正常胰腺组织各8例.采用实时荧光定量PCR和基因芯片法检测5组组织中Beclin-1 mRNA和microRNA (miR)-216a的表达.对以上组织行原代细胞培养,分为空白对照组和PD98095组(加入PD98095抑制剂),采用Western blot法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGR)与磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2 (p-ERK1/2)的表达.结果 与正常对照组比较,腺癌组和鳞癌组组织中Beclin-1 mRNA和miR-216a的表达水平较低(P＜0.05),腺癌组、鳞癌组、黏液性囊腺瘤组和慢性胰腺炎组组织中Beclin-1 mRNA和miR-216a的表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).与同类组织的空白对照组比较,腺癌组和鳞癌组加入PD98095后,细胞中p-ERK1/2和VEGF蛋白的表达水平下调(P＜0.05),但黏液性囊腺瘤组、慢性胰腺炎组和正常对照组加入PD98095前后细胞中p-ERK1/2及VEGF蛋白的表达水平变化不大(P＞0.05).结论 Bedin-1 mRNA、miR-216a和VEGF蛋白的表达与胰腺癌的发生发展可能有关.
