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丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达
目的:为探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白的功能,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)的方法在HCV全长质粒pBRTM/HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因,克隆到pGEM-T 载体中,双酶切后回收连接到酵母表达质粒pGBKT7中表达.提取酵母蛋白质,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析.结果:成功构建HCV核心蛋白基因酵母表达载体,Western 免疫印迹显示了HCV核心蛋白在酵母细胞中表达.表达产物在胞内存在,分子量 22 000 ku 左右.结论:HCV核心蛋白在酵母中表达成功.
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肝脏活检在异基因造血干细胞移植中的应用
目的评价肝脏活检在异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后肝功能损害患者中的诊断及治疗意义.方法病例选自北京大学人民医院血液病研究所1999年2月至2004年1月所做的10例Allo-HSCT并接受肝脏活检的患者,男5例,女5例.年龄15～56岁(中位34.5岁).其中白血病8例,骨髓异常增生综合征1例,重症再生障碍性贫血1例.移植方式包括非血缘骨髓移植1例,同胞全相合Allo-HSCT 6例,单倍体移植1例,脐带血移植2例.预处理方案,采用全身照射加环磷酰胺2例,非全身照射方案8例.移植物抗宿主病全部采用环胞菌素A加短程甲氨蝶呤加霉酚酸酯方案.移植前供受者常规接受肝功能及乙肝、丙肝病毒检测.10例患者均接受经皮肝穿刺活检,得到肝组织标本分别经苏木素-伊红和Masson染色在光学显微镜下观察及免疫组织化学检测.结果10例患者Allo-HSCT后出现肝功能损害的时间为2～5个月,中位3.8个月.移植前7例患者HBV、HCV检测阳性,移植后仍阳性.移植前后3例患者HBV、HCV检测全部阴性,临床诊断为移植物抗宿主病(GVHD)肝损害.10例患者在出现肝功能损害时,9例伴有不同程度慢性GVHD(cGVHD)其他表现.10例患者均根据临床诊断采用初始治疗后,肝功能改善不好.分别于Allo-HSCT后4～12个月(中位5.5个月)行肝脏活检.病理结果3例肝炎病毒阴性者为cGVHD肝损害,其余7例为肝炎病毒感染合并cGVHD肝损害.3例单纯诊断为cGVHD肝损害患者,经调整抗GVHD药物后,肝功能恢复;其余7例患者采用抗病毒及调整免疫抑制剂等综合治疗,结果2例肝功能恢复并存活.5例死亡,其中2例在治疗中肝功能改善不好,因合并肺部感染死亡,3例因肝功能衰竭,肝昏迷死亡.结论Allo-HSCT后,对于临床诊断肝脏GVHD肝损害而治疗效果不好的患者,肝脏活检可起到鉴别诊断和指导进一步治疗的作用.肝炎病毒感染与GVHD肝损害合并存在者预后差.肝活检对指导治疗具有一定局限性,还需结合临床及病理制订治疗方案.
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丙型肝炎病毒核心抗原的转位表达与肝（癌）细胞凋亡的关系
目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原的转位表达与肝（癌）细胞凋亡的关 系及其意义. 方法 采用免疫组织化学方法检测HCV核心区抗原和NS3区抗 原在肝硬变（LC）和肝细胞肝 癌（HCC）组织中的分布，同时对连续切片进行原位凋亡检测并计算凋亡指数. 结果 HCV核 心区抗原定位于肝细胞或肝癌细胞的胞质或胞核中，在LC组织中，核心抗原呈弥漫或灶状分 布于肝细胞胞质，偶见胞核阳性的肝细胞，阳性率为60.7%；核心抗原在癌组织中以核阳性 分布为主，阳性率为37.6%，癌旁肝组织以胞质阳性为多见. HCC中HCV核心抗原的核阳性率 （75.0%, 15例/20例）明显高于其在LC（17.7%, 6例/34例）及癌旁肝组织（11.8%，2 例/17例 ）中的阳性率（P＜0.05）；在HCC中，HCV核心抗原核转位表达的癌组织的AI值（0.174 ±0.093）显著低于胞质阳性的癌组织（0.512±0.113，P＜0.01）. HCV NS3区抗原定 位于肝细胞或肝癌细胞的胞质中，在LC和HCC组织中的阳性率分别为53.6%和39.6%. 未发现H CV NS3区抗原的表达与肝（癌）细胞凋亡的相关性. 结论 HCV感染与我国 LC，HCC的发生关系密切，HCV核心抗原在肝癌组织中常发生核转位表达，这种核转位表达抑 制了肿瘤细胞发生凋亡，从而促进肿瘤组织的进一步恶化.
