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免疫层析技术在食品违禁成分检测中的应用
随着社会的发展和人们生活水平的提高,食品问题越来越引起人们的关注.本文分别阐述了荧光微球免疫层析技术、胶体金免疫层析技术、纳米金免疫层析技术在食品违禁成分检测中的运用.
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酶联免疫吸附法与免疫层析技术检测梅毒的特异性与灵敏度对比研究
目的 分析酶联免疫吸附法与免疫层析技术检测梅毒的特异性与灵敏度情况.方法 选择2016年2月至2017年2月来我院就诊的TP感染患者血清样本120例,以TP-PA法为金标准,分别对以上患者行血清TP-ELISA法、GICA法检测.结果 TP-ELISA法在梅毒Ⅰ期、Ⅲ期的检出率与总检出率结果比较接近金标准TP-PA法,而明显高于GICA法,对比差异明显(x2=15.2836,P＜0.001;x2=32.0777,P＜0.001).三种方法在梅毒Ⅱ期检出率结果差异无统计学意义(P＞0.05).TP-PA诊断结果阳性样本18例,阴性样本102例,阳性率为15.00％;TP-ELISA法诊断结果呈阳性17例,阳性率为14.17％;GICA法诊断结果呈阳性20例,阳性率为16.67％(x2=2.0724,P=0.3548).TP-ELISA法诊断梅毒的特异性为99.01％,阳性预测率为94.12％均明显高于GICA法,差异有统计学意义(x2=4.6837,P=0.0305;x2=4.5973,P=0.0320),而TP-ELISA法诊断梅毒的灵敏度为88.88％,阴性预测率为98.05％也均明显高于GICA法,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TP-ELISA法不仅在梅毒分期诊断检出率较高,在诊断灵敏度、特异性、阴阳性预测值均优于CICA法,可作为梅毒诊断首选筛查方法.
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狂犬病毒胶体金检测试纸的制备及初步应用
目的 利用胶体金免疫层析技术建立一种快速、简便、特异的狂犬病毒检测方法. 方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金标记鼠抗狂犬病毒单克隆抗体,包被于结合释放垫处,分别利用纯化的兔抗狂犬病毒多克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线及质控线,组装胶体金检测试纸. 结果 制备的狂犬病毒胶体金试纸对15个接种狂犬病毒乳鼠脑组织的检测均为阳性,与FAT结果一致;对犬瘟热病毒、犬细小病毒及犬冠状病毒细胞培养液及9个狂犬病毒阴性乳鼠脑处理液的检测均为阴性. 结论 用制备的狂犬病毒胶体金试纸检测狂犬病毒快速、简便、特异,具有良好的临床应用前景.
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人乳头瘤病毒快速检测分型方法的临床应用
目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)免疫层析技术快速检测分型方法的临床应用价值.方法 采用免疫层析技术快速检测法对人乳头瘤病毒进行检测分型,采用基因检测技术PCR检测法作对照.结果 对386例标本进行HPV常见亚型6、11型和16、18型检测,快速检测法与对照PCR检测法均105例阳性,阳性率均为27.20％,两种方法的阳性率一致(P＞0.05).对HPV亚型总的分型检测,快速检测法检出阳性105例,阳性率为27.20％；对照PCR检测法检出HPV阳性142例,阳性率为36.78％,两种方法的阳性率差异有统计学意义(x2=8.15,P＜0.05).结论 免疫层析快速检测分型方法用于HPV常见亚型6、11型(低危型)和16、18型(高危型)检测,具有操作简便,检测速度快,准确率高,医疗成本较低等特点,值得基层医院推广应用.
关键词： 人乳头瘤病毒(HPV) 免疫层析技术 分型 聚合酶链反应 -
西方马脑炎病毒抗体快速检测试纸条的研制
目的 研制一种快速检测西方马脑炎病毒(WEEV)抗体的试纸条.方法 利用胶体金标记和免疫层析技术,用25 nm胶体金标记葡萄球菌A蛋白,并用硝酸纤维膜包被WEEV抗原及羊抗兔IgG作为检测带和质控带,研制出WEEV抗体快速检测试纸条.对该试纸条的敏感性、特异性和稳定性做出评价,并拟合检测曲线进行半定量检测.在健康人血清、兔血清和鼠血清中添加WEEV抗体模拟污染样品,评价该方法的检测能力.结果 该试纸条可在20 min内完成定性和半定量检测,灵敏度为120 ng/ml,模拟样品的检测灵敏度也相同.线性范围120～1200 ng/ml.对发病症状相似以及近缘的其他病毒进行检测,均无非特异反应.试纸条在37℃下保存1个月,检测结果不变.结论 该试纸条具有快速、简便、灵敏、特异、稳定的特点,适用于现场检测.
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贝氏柯克斯体重组抗原P1表达纯化及胶体金免疫层析方法的建立
目的 制备贝氏柯克斯体的重组外膜蛋白P1,并建立一种快速检测贝氏柯克斯体抗体的胶体金免疫层析方法.方法 利用贝氏柯克斯体主要的表面蛋白P1的良好免疫原性和免疫反应性,对已构建的表达P1抗原的重组工程菌,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达P1重组蛋白,通过蛋白纯化、复性、浓缩等过程获得目的蛋白.纯化的P1重组抗原包被硝酸纤维素膜,胶体金标记SPA,建立检测贝氏柯克斯体抗体的免疫层析方法,评价该方法的特异性、灵敏性、稳定性及应用性.结果 纯化后获得分子质量(Mr)为52000的目的蛋白,纯度为94％.建立了快速检测贝氏柯克斯体特异性抗体的方法,对阳性参照样本检测,目测灵敏度可达1∶105,采用金标仪半定量检测灵敏度可达116 ng/ml;对94份鼠血清和90份健康人血清检测,无阳性检出；对布鲁氏菌、普氏立克次体、军团菌、土拉弗朗西斯菌等传播途径和临床特征相似的病原抗体进行检测,未发生交叉反应.结论 利用重组抗原建立的贝氏柯克斯体抗体胶体金免疫层析方法具有较好的敏感性和特异性,可用于传染病快速筛查.
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蓖麻毒素单抗制备及上转发光免疫层析定量检测方法研究
目的：建立一种可快速、精确地对蓖麻毒素（ RT）进行定量检测的上转发光免疫检测技术（ UPT-LF），即RT-UPT-LF。方法采用杂交瘤细胞技术制备蓖麻毒素单克隆抗体并对效价进行评价；采用效价高的4种单抗分别与上转发光纳米颗粒（ UCP-NP）共价偶联，分别作为检测带，进而两两配伍，确定优的配伍组合条件建立RT-UPT-LF方法；对RT-UPT-LF的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果与结论所建立的RT-UPT-LF方法可在15 min内完成对蓖麻毒素的检测，灵敏度可达0．5 ng／ml，定量范围为0．5～1000 ng／ml，与其他高浓度毒素无非特异反应，该法为蓖麻毒素检测提供了一种新手段。
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免疫层析技术在维和医疗中对疟疾诊断的实用价值
疟疾是一种严重危害人类健康的世界性流行传染病,尤以热带和亚热带地区多发.在非洲,死亡儿童有1/5由疟疾导致.在疟疾流行国家,人口的1/3和住院病人的1/4患有疟疾.目前,疟疾的检测方法有多种:免疫学方法[主要有免疫荧光测定(IFA)、酶联免疫吸附测定(ELSA)法等]、血沉棕黄层定量分析法(QBC)、聚合酶链反应(PCR)技术、免疫层析技术(ICT)及血液涂片染色镜检法等.现将不同方法的检测特点进行分析以探讨其在维和医疗中对疟疾的诊断价值.
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支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用
目的 研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,以诊断肺炎支原体感染.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A;用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜;组装成免疫色层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测.结果 用该试纸检测了88份肺炎患者血清标本和80份正常人血清标本,结果与两个国外公司、一个国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致.结论 该诊断试纸具有较好的特异性和敏感性,简便快速,适合基层单位使用.
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支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用
目的 研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,从而诊断肺炎支原体感染.方法 采用柠檬酸三钠还原法制帑胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A;用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜;组装成免疫层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测.结果 用该试纸检测了88份肺炎血清标本,与两家国外公司、1家国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致.结论 该试纸具有较好的特异性和敏感性,并且更简便快速,适合基层单位使用等特点.
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免疫层析技术的研究进展
免疫层析技术(immunochromatography assay, ICA)是20世纪末发展起来的一种结合了免疫技术和色谱层析技术的检测分析方法.以胶体金为标记物的层析技术,作为一种快速检测试纸条目前广泛应用于多个领域.随着纳米科技的发展,各种标记物的相继出现,免疫层析技术得到了巨大的发展,从之前的只能定性检测到现在的半定量检测或定量检测,不仅检测的灵敏度提高了,结果的误判率也大大减少.免疫层析技术的开发应用具有广阔的前景,现对其研究现状、应用情况作一综述.
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免疫层析技术的发展及在POCT中的应用
免疫层析技术因其简单 、方便 、易操作 、快速,价格相对低廉,已广泛应用于即时检测(POCT).随着POCT检测项目的增多和对已有项目检测定量 、灵敏度 、特异度等要求的提高,本文就免疫层析技术的新发展及其应用,作以下综述.
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免疫胶体金快速诊断技术应用进展
胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、杞橼酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并通过静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。免疫胶体金快速诊
断技术是基于酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、单克隆抗体技术、免疫胶体金技术和新材料技术的新型技术，由于其具有便捷、灵敏、安全、低成本等特点，已在诊断领域中日趋成熟［1］。 -
幽门螺杆菌粪便抗原纳米金侧流免疫层析快速检测板的研制及应用评价
目的 研制幽门螺杆菌(HP)粪便抗原(HPSA)纳米金侧流免疫层析快速检测板.方法 利用枸橼酸钠作为还原剂制备纳米金,标记兔抗HP多价抗体,建立双抗体夹心法的纳米金侧流免疫层析快速检测板;采用该检测板和英国Atlas公司试纸条分别对HP阳性病例组(123例)、健康体检HP阳性对照I组(109例)、健康体检HP阴性对照II组(129例)进行双盲法HPSA检测,并以14C-尿素呼气试验(14C-UBT)为金标准,对结果进行评价.结果 制备的直径40 nm纳米金大吸收波长(λmax)为525 nm,标记抗体的0.05 mol/L硼酸盐缓冲液适pH为7.6,抗体标记佳用量为18 μg/ml(小标记量为15 μg/ml);检测板与试纸条的检测结果在三组之间差异无统计学意义(χ2=0～0.337,P均<0.05);以14C-UBT结果为金标准,检测板的灵敏度、特异度、符合率分别为98.3%,99.2%和98.6%,试纸条的灵敏度、特异度、符合率分别为97.4%,98.4%和97.8%.结论 以纳米金标记多抗的双抗体夹心法侧流免疫层析快速检测板,检测HPSA诊断HP感染,方法简便、价格便宜、重复性好、无创伤,具有很高的敏感度和特异度.
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胶体金免疫层析试纸条快速检测玉米细菌性枯萎病菌
本文采用胶体金免疫层析技术成功建立了玉米细菌性枯萎病菌试纸条快速检测法.条件优化后的试纸条用于玉米细菌性枯萎病菌的检测,方法的检测限为106cfu/mL,其灵敏度与双抗夹心ELISA检测方法相当;交叉试验结果表明,该试纸条对玉米细菌性枯萎病菌有良好的特异性.本方法可作为玉米细菌性枯萎病菌日常监测的现场筛查手段,具有简便、快速、成本低廉、便于普及等优点,对保障我国农产品安全具有重要的现实意义.
