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2010年哈尔滨地区A组轮状病毒VP7G血清型监测结果分析
目的 了解2010年哈尔滨地区A组轮状病毒VP7 G血清型的流行趋势,发现2010年的主要流行株.方法 巢式逆转录聚合酶链式反应,2010年随机采集哈尔滨市儿童医院3岁以下腹泻住院患儿粪便标本,进行VP7蛋白检测和G血清型分型.结果 108份标本,检出RV VP7阳性61份(阳性率为56.48%);对61份毒株进行G型分型鉴定,G1型36株(59.06%),G3型11株(18.03%),G4型1株(1.64%),G9型3株(4.92%),G1+G3型4株(6.56%),G1+G4型2株(3.28%),未分型4株,G2型未检出,G1型为主.结论本年度G1型是主要流行毒株.
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2009～2011年大庆地区感染人轮状病毒G血清型鉴定
目的 了解大庆地区2009 ～2011年感染人的轮状病毒流行株的血清型情况.方法 采用A组轮状病毒ELISA检测试剂盒对采集来的288例腹泻标本进行轮状病毒阳性鉴定,对鉴定为阳性的腹泻标本经处理后,采用多重一步反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对轮状病毒株的血清型进行鉴定,并通过对阳性标本的轮状病毒VP7基因的核苷酸序列进行分析、比对,以进一步鉴定毒株的血清型.结果 对288例标本进行ELISA检测,RV阳性177例;血清型检测共测得G1型73例(41.2％),G2型12例(6.7％),G3型67例(37.9％),另有25例为G1和G3混合型.结论 轮状病毒是引起大庆地区婴幼儿病毒性腹泻的主要原因,对成人腹泻影响较小,2009～ 2011年大庆地区流行的RV以G1和G3型为主.此外,出现了G1和G3混合型,说明病毒血清型之间出现了一定重组变异.
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A组轮状病毒G3型哈尔滨地方株VP7基因序列分析
目的:了解我国A组轮状病毒G3型哈尔滨地方株与标准株及国内外部分地区G3型地方株VP7蛋白基因序列的差异,为轮状病毒疫苗在我国东北地区的研发与应用提供资料.方法:通过一步法RT-PCR获得了6株轮状病毒哈尔滨地方株VP7蛋白的cDNA片段,,对其进行扩增、克隆、测序.用DNASTAR生物软件进行序列分析.结果:6株哈尔滨地方株VP7蛋白推导氨基酸序列同源性99.4%～100%;与G3标准株Crw-8的同源性为94.2%;与G1、G2、G4标准株比对变异较大(75.2%～82.2%);哈尔滨地方株氨基酸序列在aa108、aa266、aa268、aa278位点的变异完全相同.结论:6株轮状病毒G3型哈尔滨地方株来源于相同的一支G3型轮状病毒毒株.
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轮状病毒VP7基因的克隆与表达
目的 构建轮状病毒VP7的重组表达质粒,在大肠杆菌中对其进行表达.方法 克隆编码轮状病毒VP7的基因.并在原核表达系统中表达了带有6 xHis标签的融合蛋白.结果 经双酶切鉴定和基因测序证明成功重组了轮状病毒VP7基因的pQE-30重组质粒;蛋白质PAGE电泳表明,获得了分子量约为48000 Mr的蛋白质.结论 本研究获得了重组的轮状病毒VP7蛋白.
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人源A组轮状病毒VP7蛋白重组乳酸菌的制备及免疫原性研究
为研制出一种安全有效的RV口服疫苗提供前期的理论与试验基础,本研究将用PCR技术扩增得到的vp7蛋白的全长基因克隆入可在大肠杆菌和干酪乳杆菌之间穿梭的表面表达载体pLA中,构建得到重组质粒pLA-vp7,并将其电转化到干酪乳杆菌中,制备了pLA-vp7重组干酪乳杆菌.
