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突触后致密物蛋白质95基因沉默及对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为的干预
目的 评估小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对突触后致密物蛋白质95(postsynaptic density protein 95,PSD-95)基因的沉默效率及PSD-95基因沉默对谷氨酸诱导的神经细胞毒性与信号转导的影响,观察用RNA 干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默大鼠脊髓PSD-95基因治疗神经病理性疼痛的效果.方法 用神经母细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞(NG108-15细胞)筛选大鼠PSD-95基因特异的siRNA,并用谷氨酸刺激PSD-95基因沉默的NG108-15细胞,检测细胞生长活力与信号通路蛋白质表达与磷酸化的改变.建立大鼠神经病理性疼痛的坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury,CCI)模型,预防性及治疗性鞘内给予PSD-95siRNA,留取脊髓标本,实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)分析PSD-95 mRNA表达水平,并测定大鼠后足机械痛阈及热痛阈的变化.结果 序列特异性高的siRNA在佳转染条件下使PsD-95基因表达水平下降91.5％；PSD-95基因沉默既可增强神经细胞对谷氨酸毒性的耐受能力,又可抑制Ca2/钙调蛋白依赖的蛋白质激酶Ⅱα (CaMKⅡα)异构型磷酸化.正常大鼠鞘内注射PSD-95 siRNA可降低大鼠脊髓背角PSD-95 mRNA的表达水平38％ (P ＜0.05),但对痛阈无显著影响；CCI模型大鼠鞘内注射PSD-95 siRNA可明显缓解神经病理性疼痛.结论 PSD-95基因在神经病理性疼痛的发生中起重要作用.鞘内注射PSD-95 siRNA可以显著缓解CCI模型大鼠机械性和热痛觉过敏,PSD-95 siRNA可能成为有效控制神经病理性疼痛的基因治疗方法.
