首页 > 文献资料
-
普鲁卡因酰胺诱导肝癌细胞启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达
目的研究HepG2肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化与GSTP1基因表达的关系,并探讨普鲁卡因酰胺用于诱导因甲基化失活的GSTP1基因重新表达的可能性.方法分别用5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和普鲁卡因酰胺处理HepG2细胞后培养,甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞中GSTP1基因的甲基化状况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞中GSTP1 mRNA和GST-π的表达.结果 HepG2细胞在去甲基化药物处理前, GSTP1基因完全甲基化,GSTP1基因不表达;药物处理后,普鲁卡因酰胺组和5-Aza-CdR组GSTP1基因有表达.结论肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化可抑制GSTP1基因表达,普鲁卡因酰胺与5-Aza-CdR一样能使启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达.
-
诱导子宫内膜癌细胞DNA错配修复及肿瘤增殖抑制基因启动子CpG岛去甲基化修饰的研究
目的:研究在用5-杂氮-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导体外培养的人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2及细胞周期调控基因p16启动子CpG岛的去甲基化,及对于该细胞的增殖抑制作用.方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A;利用MTT比色法检测5-Aza-CdR对于HEC-1-A的增殖抑制的影响;利用流式细胞术(FCM)分析药物处理前后HEC-1-A的细胞周期;利用重亚硫酸盐处理及甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测hMLH1、hMSH2及p16基因启动子CpG岛的甲基化修饰;提取药物处理前后HEC-1-A细胞的总蛋白,利用Western blotting检测hMLH1、hMSH2及p16蛋白的表达情况.结果:5-Aza-CdR对于人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IC50为(0.71±0.05)μmol·L-1];FCM分析显示HEC-1-A细胞在5-Aza-CdR处理前后均呈现明显的细胞周期差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期(P<0.05)阻滞.MS-PCR分析5-Aza-CdR显示著诱导hMLH1、hMSH2基因启动子CpG岛的去甲基化修饰.Western blotting检测发现IC50剂量的5-Aza-CdR处理HEC-1-A细胞前后,hMLH1、hMSH2及p16的表达量为(111.30±3.17)%、(76.99±1.19)%和(97.63±1.28)%明显高于空白对照组(P<0.05),提示该药物有提高上述蛋白表达的作用.结论:5-Aza-CdR可诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,hMLH1、hMSH2及p16启动子CpG岛的去甲基化修饰,从而有效抑制该细胞的体外增殖.
关键词： 子宫内膜癌 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 DNA错配修复基因 甲基化修饰 增殖抑制 -
DNA 甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞株CNE2的影响
目的 探讨DNA 甲基转移酶抑制剂5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2的影响.方法 应用10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L浓度的5-aza-2dC,处理人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2 12、24、36、48、72 h后,应用MTT法测定CNE2细胞株的生存情况,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.用甲基化特异性PCR检测药物处理前后死亡相关蛋白激酶(DAPK)启动子甲基化状态.结果 同一作用时间不同药物浓度组间,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),且作用72 h对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长抑制作用强.流式细胞仪检测结果显示:10-4 mol/L 5-aza-2dC诱导细胞凋亡明显(P<0.01).甲基化特异性PCR显示鼻咽癌细胞株中,5-aza-2dC 可成功逆转DAPK基因启动子高甲基化状态.结论 5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.
关键词： 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 人低分化鼻咽鳞癌细胞 -
5-杂氮-2′-脱氧胞苷对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响
目的 检测E-cadherin基因在激素非依赖性前列腺癌(HIPC)细胞上的表达及启动子CpG岛甲基化,探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HIPC细胞的影响及意义.方法 2.5、5.0、10.0 μmol/L的5-Aza-CdR处理PC-3细胞72h后,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测CpG岛甲基化改变,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测E-cadherin mRNA变化,Westernblot方法检测E-cadherin蛋白变化,Transwell小室检测细胞侵袭性改变.结果 HIPC的E-cadherin启动子CpG岛甲基化呈阳性,基因表达缺失,细胞侵袭性明显.经5-Aza-CdR作用之后,CpG岛甲基化阳性明显减弱(P＜0.05),E-cadherin基因恢复表达(P＜0.05),PC-3细胞的侵袭性下降约59.68％,且与药物的浓度呈正相关.结论 5-Aza-CdR可逆转PC-3细胞E-cadherin启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达,并降低癌细胞的侵袭性.
关键词： 前列腺癌 E-cadherin 甲基化 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 -
5-杂氮-2′-脱氧胞苷对实验性乳腺癌肺转移的影响
目的 探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞实验性肺转移的影响及可能的机制.方法 将MDA-MB-231细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,通过半定量RTPCR(SqaT-PCR)与甲基化特异性PCR(MSP)方法检测两组细胞的乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1),CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因的mRNA表达及启动子区甲基化的状况.分别将两组细胞通过边缘尾静脉注射至BALB/c nu/nu裸鼠体内(每组5只).5周后,用荧光定量 RT-PCR(FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内的目的基因HPRT及内参GAPDH的mRNA丰度.结果 对照组和处理组细胞的BRMS1相对灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达较对照组明显上调(P<0.05).5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化;CXCR4相对IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组间差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变.对照组与处理组细胞的裸鼠肺脏HPRT和GAPDH的Ct值分别为:24.75 ±1.55,16.19±0.69与27.61±1.67,17.48±0.96,2-ΔΔct=0.34,处理组裸鼠肺脏HPRT mRNA丰度明显低于对照组,肺组织内转移癌较少.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞实验性肺转移能力.
-
5-杂氮-2′-脱氧胞苷抗白血病作用的体外研究
目的:研究甲基转移酶抑制荆5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60生长、分化、凋亡的影响,初步探讨其抗白血病作用的可能机制.方法:不同浓度和时间的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用MTT比色试验检测5-aza-2dC对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞周期及分化的影响;采用Hochest33342染色和流式细胞术检测5-aza-2dC时HL-60细胞凋亡的影响;采用RT-PCR法检测药物处理对S100A8和S100A9基因mRNA表达水平的影响.结果:(1)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞的生长,并使HL-60细胞周期阻滞于G2/M期;(2)5-aza-2dC处理使HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,在低浓度(0.5 μmol/L)时其促分化作用明显;(3)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地诱导HL-60细胞凋亡,在高浓度(5.0μmol/L)时诱导凋亡的作用明显;(4)5-aza-2dC能明显上调S100A8和S100A9基因mRNA的表达.结论:5-aza-2dC能抑制HL-60细胞生长,阻滞HL-60细胞于G2/M期,促进HL-60细胞分化和诱导其凋亡,并能上调S100A8和S100A9基因的表达,这些作用可能是5-aza-2dC抗急性髓系白血病的重要机制.
-
5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用
背景与目的:5-杂氮-2′-脱氧胞苷是DNA甲基转移酶抑制剂,能使因甲基化而失活的抑癌基因重新激活,进而抑制肿瘤的生长.本文观察了5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其抗肿瘤效应及可能的机理,寻找鼻咽癌治疗的新靶点.方法:用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理人鼻咽癌细胞,观察其对细胞生长的抑制及死亡相关蛋白激酶基因(death-associated protein kinase,DAPK)甲基化情况.建立人鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,用5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况,并用RT-PCR和免疫组织化学技术检测DAPK基因mRNA及蛋白表达的变化.结果:未经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理的CNE细胞中DAPK mRNA不表达.经5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理后,不同药物浓度组的细胞中均有DAPK mRNA表达,且表达随浓度增高而增强.5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长均有明显的抑制作用,且能使失活的DAPK基因重新激活.药物作用4周后,用药组裸鼠体重(22.35±2.02)g与对照组(21.68±2.14)g之间无显著性差异(t=0.011,P＞0.05),用药组肿瘤的体积(195.32±27.57)mm3较对照组(343.67±23.08)mm3明显减小,两者之间有显著性差异(t=10.11,P＜0.01).在鼻咽癌移植瘤中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达.结论:5-杂氮-2′-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为其使因甲基化而失活的抑癌基因DAPK再转录,诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖.
关键词： 鼻咽肿瘤 移植瘤 裸鼠模型 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 死亡相关蛋白激酶 -
去甲基化药物对胃癌细胞中K A I1基因表达水平影响初探
目的 分别检测正常胃黏膜、低分化胃癌细胞株BGC-823及使用去甲基化药物后胃癌细胞株BGC-823中KAI1基因的表达情况,对胃癌细胞中KAI1基因甲基化对KAI1基因mRNA表达水平的影响做一个初步的探讨.方法 首先采用BSP法分别检测了正常胃黏膜与去甲基化药物使用前后胃癌细胞株BGC-823中KAI1基因甲基化的水平.其次,采用RT-PCR法分别检测正常胃黏膜与去甲基化药物使用前后胃癌细胞株BGC-823中KAI1基因mRNA量的变化.结果 BSP法检测结果显示BGC-823细胞中KAI1基因出现明显甲基化,正常胃黏膜组织中KAI1基因则未见甲基化;RT-PCR结果显示正常胃黏膜中KAI1基因mRNA表达量达66.68%,而未使用去甲基化药物的BGC-823细胞中KAI1基因mRNA表达量与使用去甲基化药物的胃癌细胞株BGC-823组比较提高了3倍.结论 KAI1基因在胃癌细胞中表现出明显去甲基化,使用去甲基化药物可使胃癌细胞中KAI1的mRNA表达水平明显提高.
关键词： 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 KAI1 胃癌细胞株BGC-823 -
5-杂氮-2′-脱氧胞苷降低了乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外迁移能力
目的 探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移能力的作用及可能的机制.方法 实验分为对照组与5-Aza-CdR处理组,分别通过Transwell趋化迁移及划痕实验、半定量逆转录PCR(SqRT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)等方法检测MDA-MB-231细胞的体外迁移能力、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)与CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达、BRMS1与CXCR4启动子区甲基化状况.结果 对照组与处理组细胞穿过Transwell聚碳酸酯滤膜的数量分别为1 290.00±214.64与673.00±44.00,处理组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);24、36、48 h时间点对照组与处理组细胞划痕愈合率分别为20.34±0.69、59.31±0.38、91.77±0.13 与 20.19±0.67、49.32±0.24、69.47±0.46,其中36 h与48 h时间点处理组愈合率明显降低(P<0.05);对照组与处理组BRMS1的相对于内参GAPDH的灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达明显上调(P<0.05),5-Aza-CdR使 BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化,对照组与处理组CXCR4的相对于内参GAPDH 的IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变.结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞体外迁移能力.
