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幽门螺杆菌毒力基因与克拉霉素耐药基因突变相关性
目的 分析浙江省台州地区幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)cagA和VacA为主的毒力基因型分布,探讨其与克拉霉素耐药基因突变类型的关系.方法 招募存在上消化道症状患者,并行胃镜检查活检患者胃黏膜组织.通过Hp分离培养方法,培养出216株Hp.采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测并分析cagA和VacA的分型情况.采用PCR扩增和Sanger测序技术检测克拉霉素耐药基因(23S rRNA)2142和2143位碱基点突变情况.结果 CagA基因的阳性检出率为99.54％ (215/216),其中CagA-D为95.83％ (207/216)、CagA-C为3.70％ (8/216).VacA基因阳性检出率为97.22％ (210/216),s1、s2、m1、m2亚型分别为97.22％ (210/216)、0、35.19％(76/216)、60.65％(131/216).本研究发现,浙江省台州地区毒力基因以CagA-D和VacAs1m2型为优势基因型.此外,23S rRNA基因2142和2143位点均未突变的有93株.突变的有123株,其中A2142G位点突变4株、A2143G位点突变119株.毒力基因型与23S rRNA基因2142和2143位点突变类型无相关性(P＞0.05).结论 台州地区为HP高毒力地区,且以CagA-D和VacAs1m2型为主,其分布与克拉霉素耐药基因突变无密切相关性.
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基于新型淬灭剂建立荧光 PCR 甄别幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因突变的方法
目的：采用新型淬灭剂结合荧光 PCR 检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因突变的检测方法。方法根据幽门螺杆菌23S rDNA 第2142和2143两个基因多态性位点设计引物和标记新型荧光淬灭剂的探针；提取幽门螺杆菌菌体总 DNA，采用实时荧光定量 PCR 方法对收集的55株幽门螺杆菌临床分离株进行检测，同时与 TaqMan 探针和直接测序方法结果进行比对，进一步评价其临床实用性。结果本试验建立的方法能特异性地甄别23S rDNA第2142和2143位点的基因多态性，除对应位点的探针出现荧光信号外，其他探针均为阴性。该方法的变异系数小于5％，样本灵敏度可达到1 copy／反应。对收集的55株幽门螺杆菌临床分离株进行检测，检测到AA 型菌株36株（65.45％）、AG 型菌株15株（27.27％）和 GA 型菌株4株（7.27％），与 TaqMan 探针及直接测序结果均一致。结论本试验所建立的方法能有效甄别幽门螺杆菌克拉霉素耐药基因突变位点 A2142G 和A2143G。
