首页 > 文献资料
-
miR-27b在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制
目的 探讨miR-27b在雌激素受体(ER)阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制.方法 通过反转录实时定量PCR测定miR-27b的表达.用双荧光素酶报告和蛋白质印迹实验验证miR-27b对HMGB3的靶向调控作用.在他莫昔芬敏感(TamS)或耐药(TamR)的MCF-7细胞中过表达miR-27b或敲减HMGB3后测定细胞活力,分析上皮和间质标志物的表达,检测细胞侵袭力.结果 TamR MCF-7细胞中miR-27b的水平约为TamS MCF-7细胞的20％.过表达miR-27b增加了4-羟基他莫昔芬(4-OHT)对TamR MCF-7细胞的活力抑制.TamS与TamR细胞在miR-27b过表达后,穿膜细胞数目均明显减少.在TamR MCF-7细胞中,转染miR-27b mimics增加了约3倍的E-cadherin表达,同时也降低了约70％的N-cadherin表达.miR-27b可以结合预测的HMGB3 3'非翻译区(UTR)结合位点并降低HMGB3在蛋白水平的表达.HMGB3敲减和miR-27b过表达具有类似的生物学功能.结论 miR-27b可以通过抑制HMGB3的表达抑制乳腺癌细胞上皮间质转化并增强乳腺癌细胞他莫昔芬敏感性.
-
槐定碱抑制人胃癌MKN45细胞的增殖并促进其凋亡
本研究旨在探讨槐定碱对人胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.将人胃癌MKN45细胞分为对照组和槐定碱组 (设立6个浓度亚组) .用MTT法检测MKN45细胞增殖情况, 用免疫细胞化学染色法和Western blot观察细胞高迁移率组蛋白3 (high mobility group-box 3, HMGB3) 的蛋白表达, 用Hoechst 33342染色法观察细胞形态变化, 用流式细胞术检测细胞凋亡.结果显示, 槐定碱作用48 h能显著抑制MKN45细胞的增殖, 作用呈剂量依赖性.与对照组相比, 槐定碱作用48 h后MKN45细胞的HMGB3蛋白表达显著减少 (P〈0.05), 细胞凋亡率显著升高 (P〈0.05) .以上结果提示, 槐定碱作用48 h可抑制人胃癌MKN45细胞的增殖, 促进其凋亡, 其机制可能与HMGB3表达下调有关.
-
干扰Hmgb3表达对肺腺癌A549细胞增殖的影响
目的 构建针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,检测诱导稳定感染细胞株干扰序列的干扰效率及其对A549细胞增殖的影响.方法 设计Hmgb3及对照GFP shRNA序列,装入Tet-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定株,筛选佳诱导浓度并诱导干扰序列表达,Western blot检测干扰效率,MTT实验检测其对A549细胞增殖的影响.结果 构建的Hmgb3shRNA慢病毒稳定细胞株诱导后可显著抑制Hmgb3的表达,干扰效率达73％(P＜0.05),而对照组无明显干扰效果(P=0.721),对照组的增殖率为94％,实验组的增殖率下降为46％(P＜0.05).结论 成功构建了针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,并有效沉默A549细胞靶基因,干扰Hmgb3对肺癌细胞的增殖有一定的抑制作用.
