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miR-27b在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制
目的 探讨miR-27b在雌激素受体(ER)阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制.方法 通过反转录实时定量PCR测定miR-27b的表达.用双荧光素酶报告和蛋白质印迹实验验证miR-27b对HMGB3的靶向调控作用.在他莫昔芬敏感(TamS)或耐药(TamR)的MCF-7细胞中过表达miR-27b或敲减HMGB3后测定细胞活力,分析上皮和间质标志物的表达,检测细胞侵袭力.结果 TamR MCF-7细胞中miR-27b的水平约为TamS MCF-7细胞的20％.过表达miR-27b增加了4-羟基他莫昔芬(4-OHT)对TamR MCF-7细胞的活力抑制.TamS与TamR细胞在miR-27b过表达后,穿膜细胞数目均明显减少.在TamR MCF-7细胞中,转染miR-27b mimics增加了约3倍的E-cadherin表达,同时也降低了约70％的N-cadherin表达.miR-27b可以结合预测的HMGB3 3'非翻译区(UTR)结合位点并降低HMGB3在蛋白水平的表达.HMGB3敲减和miR-27b过表达具有类似的生物学功能.结论 miR-27b可以通过抑制HMGB3的表达抑制乳腺癌细胞上皮间质转化并增强乳腺癌细胞他莫昔芬敏感性.
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微小RNA-27b对RAW264.7细胞生物学功能的作用及调控机制
[目的]在分析纳米二氧化钛引起巨噬细胞微小RNA(miR)表达谱改变的基础上,选择与免疫通路相关的miR-27b,探讨miR-27b对巨噬细胞RAW264.7的生物学功能及其对靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基3(Pik3r3)的调控作用. [方法]用Diana-mirPath在线软件对miR-27b进行生物学信息分析,并通过Targetscan软件预测靶基因位点.通过转染使RAW264.7细胞的miR-27b表达上调,采用MTT、流式细胞技术观察转染后细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化,应用Western blot检测靶基因的蛋白表达水平. [结果]Diana-mirPath在线软件进行miR-27b的信号通路及靶基因分析结果显示,miR-27b参与的信号通路-lnP≥2.99(P＜0.05)的有23个,其中得分高的通路为T细胞受体信号通路(T cell receptor signaling pathway),得分为16.89.靶基因预测结果显示Pik3r3可能是其靶基因之一.转染miR-27b模拟物后,转染组与阴性对照组相比较,光密度值无明显差异(P=0.725),细胞周期也无明显差异(G1、S和G2期分别为P=0.490,P=0.088,P=0.323),但细胞凋亡率明显增高(P=0.023).此外,转染组Pik3r3蛋白表达量无明显差异(P＞0.05).[结论] miR-27b可促进RAW264.7细胞凋亡,其调控机制尚需进一步研究.
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miR-27b对IL-17诱导下MCP-1表达的影响作用
微小RNA(microRNA,miRNA)是一种基因表达调控因子,本研究旨在研究miR-27b对IL-17诱导下的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.我们转染miR-27b mimic于H9C2细胞中,采用SYBR green I荧光定量PCR检测H9C2心肌细胞中miR-27b和MCP-1基因的表达情况,以ELISA分析H9C2细胞培养上清液中MCP-1蛋白的表达.在IL-17对MCP-1表达的影响的研究中,结果显示,IL-17作用2h后MCP-1 mRNA的表达量开始升高,4h时达到高峰,尔后开始下降,而MCP-1蛋白的表达量0～24 h逐渐升高.在miR-27b对IL-17诱导下MCP-1表达的影响的研究中,结果显示,IL-17组与空白对照组比较,MCP-1 mRNA和蛋白水平显著升高(P＜0.05);IL-17组与转染miRNA阴性对照+IL-17组比较,两组的MCP-1 mRNA和蛋白水平无显著差异(P＞0.05);转染miR-27b mimic+ IL-17与转染miRNA阴性对照+IL-17组比较,MCP-1 mRNA和蛋白水平显著下降(P＜0.01).本研究表明,(1)IL-17可上调MCP-1的表达,这与IL-17的作用时间有关.(2)过表达miR-27b可下调IL-17诱导下MCP-1的表达水平.
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MicroRNA-27 b通过靶向调控FZD7抑制口腔鳞状 细胞癌细胞的增殖
目的 探讨microRNA-27b(miR-27b)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响及其作用的分子生物学机制.方法 MTT方法 检测细胞增殖水平;实时定量PCR方法 检测miR-27b表达水平以及卷曲蛋白7(Frizzled7,FZD7)、cyclin D1和c-myc的信使RNA(mRNA)表达水平;Western blot方法 检测FZD7的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因方法 检测miR-27b与FZD7的靶向关系以及Wnt信号通路的活性.结果 miR-27b在口腔鳞状细胞癌细胞株中表达降低;过表达miR-27b可以显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖;miR-27b可以靶向FZD7并抑制FZD7的表达及其下游的Wnt信号通路.结论 miR-27b通过靶向抑制FZD7的表达来抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖,其机制可能与抑制FZD7介导的Wnt信号通路的激活有关.
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白藜芦醇通过抑制miR-27b表达促进白色脂肪细胞的棕色化功能
目的:探讨白藜芦醇对小鼠原代白色脂肪细胞棕色化功能的影响,研究白藜芦醇调控白色脂肪棕色化功能可能的分子机制.方法:从C57BL/5J小鼠的腹股沟处分离皮下前脂肪细胞,诱导分化后使用不同浓度的白藜芦醇(0～50 μmol/L)刺激48 h,运用RT-PCR检测棕色标志因子基因及相关的miR-27b表达情况.为了验证miR-27b的作用,在细胞内过表达miR-27b,同时予白藜芦醇刺激,运用RT-PCR和Western blot检测相关重要转录因子的基因及蛋白表达.结果:白藜芦醇促进了小鼠原代白色脂肪细胞棕色化功能基因的表达,抑制了原代白色脂肪细胞miR-27b表达,并呈剂量效应.过表达miR-27b显著抑制了白藜芦醇增强棕色化标志基因mRNA表达的作用.在蛋白水平上,过表达miR-27b同样抑制了白藜芦醇增强其靶基因PRDM16和棕色标记基因UCP1蛋白表达的作用.结论:白藜芦醇通过抑制miR-27b表达增强了白色脂肪细胞的棕色化功能,从而为临床有效改善机体能量代谢、防治代谢综合征提供了新策略.
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miRNA-27b在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的:探讨微小RNA(miRNA)-27b在骨肉瘤中的表达情况及诊断和预后价值.方法:选取经病理证实为骨肉瘤的患者血样51例,年龄和性别相匹配的51例健康者血样作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤患者及健康对照组血清miR-27b表达水平.结果:相较于健康对照组,骨肉瘤患者血清中miR-27b表达水平明显升高(P＜0.001).miR-27b的高水平表达与较大的肿瘤体积(P=0.008),较高的TNM分级(P=0.001)及远处转移(P=0.001)相关.受试者工作曲线(ROC)提示血清miR-27b水平对骨肉瘤患者具有诊断价值.曲线下面积(AUC)为0.863,其中敏感度为77.8％,特异度为86.7％.Kaplan-Meier曲线分析表明miR-27b高水平表达组5年生存率较低.此外,单变量和多变量Cox回归分析表明miR-27b是骨肉瘤患者预后的一个独立危险因素(P＜0.001和P=0.006).结论:血清miR-27b水平可能成为骨肉瘤患者诊断及判断预后的生物标志物.
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miR-27b在先天性心脏病合并肺动脉高压中的表达及意义
目的 探讨miR-27b在肺动脉高压发生机制中的作用.方法 选取住院治疗的先天性心脏病室间隔缺损患者42例,其中21例合并肺动脉高压为观察组,另21例单纯室间隔缺损为对照组;静脉采血,利用实时定量PCR检测miR-27b的表达量;蛋白印迹(Western blot)法检测Bax、Bcl-2的变化水平.结果 实时定量PCR结果提示:观察组中miR-27b的表达显著升高;Western blot法检测Bax/Bcl-2则出现相反的趋势,凋亡指数降低.结论 miR-27b在先天性心脏病合并肺动脉高压患者中有差异性表达,通过线粒体凋亡途径促进了肺动脉高压形成的过程,为预防及治疗肺动脉高压提供了新的切入点.
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miRNA-27b抑制PPARγ促进乳腺癌细胞增殖
目的:通过体外实验研究过表达miR-27b对乳腺癌细胞系MCF-7增殖方面的影响,并探讨miR-27b的作用机制.方法:通过脂质体介导,将miR-27b mimics转染入MCF-7细胞,用荧光定量PCR检测细胞miR-27b的表达,用Western Blot检测PPARγ与NHE1的表达情况,再通过CCK8实验观察细胞增殖能力的改变.结果:MCF-7转染miR-27b mimics后,miR-27b的表达明显上调(P＜0.05).在蛋白水平,过表达miR-27b后,PPARγ的表达明显下调,而NHE1的表达明显上调.CCK8结果显示过表达miR-27b,细胞增殖作用增强.结论:miR-27b可抑制MCF-7细胞中靶基因PPARγ的表达,上调NHE1的表达水平,并且促进细胞增殖.
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稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞模型的建立及意义
目的 利用慢病毒表达载体建立稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞系,探讨miR-27b对结直肠癌细胞生物学特性的影响及作用.方法 构建miR-27b过表达重组慢病毒载体,经包装病毒后感染结直肠癌细胞SW480,利用流式细胞仪分选获得绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞并荧光定量PCR检测miR-27b表达情况,建立稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞系;通过MTT法和Transwel检测过表达miR-27b后细胞体外增殖、侵袭能力的变化.结果 稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞中miR-27b的表达水平是空载体对照细胞中miR-27b的5.02倍;与对照细胞相比,miR-27b过表达能够促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力(P＜0.05).结论 成功建立了稳定过表达miR-27b的结直肠癌细胞模型,为深入研究miR-27b在结直肠癌发生发展过程中的作用、调控靶基因和相应的作用机制奠定了基础.
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大鼠肝再生过程中miR-27b与Tmub1表达相关性研究
目的 探讨miR-27b与Tmub1在大鼠70％肝大部分切除术肝脏再生过程中的表达相关性.方法 将SD雄性大鼠(180±20)g,随机分为实验组(肝部分切除术,partial hepatectomy,PH)和假手术组(剖腹探查手术,exploratory laparotomy),依次提取0、12、24、48及72h原代肝细胞并留取组织标本,利用real-time PCR检测不同时间段肝脏内miR-27b与Tmub1 mRNA的量,并利用Western blot检测不同时间段肝脏内Tmub1蛋白含量,从而分析出miR-27b与Tmub1蛋白表达的时间相关性;将miR-27b模拟物转染入肝细胞,采用荧光素酶报告基因检测系统观察miR-27b对Tmub1表达的影响.结果 肝切除12、24、48及72 h后PH组miR-27b表达较假手术组均显著下降(P＜0.05),而该相同时相点Tmub1 mRNA及蛋白水平显著增高(P＜0.05);改变miR-27b的表达后,含Tmub1基因序列的报告基因荧光素酶活性明显下降(P＜0.05).结论 肝再生过程中miR-27b与Tmub1的表达呈负相关,miR-27b可能参与了Tmub1的表达调控过程.
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miR-27 b通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移
目的：找出调控胃癌细胞c-MET的miRNA，研究该miRNA能否通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。方法：预测软件筛选出可能调节胃癌c-MET的miRNA。荧光定量PCR检测胃癌细胞株（N87、MKN45、AGS）及正常胃黏膜细胞（GES1）中该miRNA的表达水平。过表达miRNA后检测胃癌细胞株AGS中c-MET的表达水平，选择对c-MET抑制强的miRNA行双荧光素酶实验。平板克隆及Tran-swell实验检测过表达该miRNA后胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力，过表达c-MET后再次检测胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力。结果：预测软件显示miR-34a、miR-27b及miR-31可能调节胃癌c-MET表达。miR-34a、miR-27b及miR-31在胃癌细胞株中表达较正常胃黏膜明显降低（ p<0.05）。West-ern bolt显示miR-27b对c-MET的抑制能力强。双荧光素酶实验同样证实了c-MET是miR-27b的直接作用靶点。平板克隆及Transwell实验显示过表达miR-27b能抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力，而过表达c-MET后能恢复胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移能力。结论：miR-27b能作用于c-MET 3′UTR端从而抑制c-MET的表达，并能通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。
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口腔扁平苔藓差异表达MicroRNAs的筛选
目的:芯片筛选口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)损害黏膜中差异表达的miRNAs.方法:收集白纹型OLP损害黏膜和正常口腔黏膜各2 例,抽提总RNA预扩增后运用Taqman 低密度芯片(v2.0)测定人类667 种miRNAs的表达谱,随后应用实时定量PCR在68 例样本中进一步验证miR- 27b的表达水平.采用miRNAs生物信息库预测miR- 27b所对应的靶基因,对芯片数据进行统计学分析.结果:筛选获得30 个OLP相关的miRNAs.相对于正常口腔黏膜,OLP损害黏膜中有18 个miRNAs表达下调,12 个上调.扩大样本量至68 例验证miR- 27b表达水平,结果与芯片实验一致.生物信息学分析得出miR- 27b的预测靶基因中有10 个与OLP发病有关.结论:筛选得到的OLP 损害黏膜中差异表达的miRNAs可能与OLP的发生相关.
