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组织块法分离人脐带间充质干细胞的研究
目的:应用组织块法分离人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)并对其生物学特性进行研究.同时探讨在不同储存条件下的脐带是否对组织块法的分离成功率产生影响.方法:无菌条件下采集足月儿的脐带,应用组织块法分离hUC-MSCs,通过流式细胞术观察其免疫学、生长特性.脐带在常温条件和冷冻条件下储存后进行组织块法分离,观察细胞生长情况.结果:应用组织块法能获得贴壁生长的hUC-MSCs,流式细胞仪分析结果显示细胞高表达常见MSC表面分子CD105、CD73及HLA-ABC;低表达造血细胞表面标记CD34、CD45及HLA-DR.常温储存条件下,随着处理时间的延长,获得原代细胞数量下降;组织冷冻后可以获得hUC-MSCs.结论:组织块分离法可以获得贴壁生长的hUC-MSCs,并成功传代扩增;脐带采集后24 h内处理,hUC-MSCs获得数量及分离成功率高;随着处理时间延长,hUC-MSCs获得数量减少,分离成功率降低.
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人脐带间充质干细胞的新分离方法及其作为骨组织工程种子细胞的相关研究
目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的新分离方法及其作为骨组织工程(tissue engineering bone,TEB)种子细胞的特点.方法 处理脐带组织,将含有杂质较多的组织去除,使剩余组织尽可能为Wharton's jelly.采用组织块培养皿(实验组)及普通培养皿(对照组)分别分离脐带间充质干细胞,统计组织块培养成功率及获取原代脐带间充质干细胞的数量.流式细胞仪检测3代细胞的表面分子,并进行成骨、成软骨、成脂诱导以鉴定其多向分化潜能.将获取的3代脐带间充质干细胞与DBM骨体外构建组织工程骨,并检测细胞与组织工程骨的黏附率,激光共聚焦及总蛋白检测来确定细胞在支架材料上的生长情况.结果 实验组与对照组培养12d时组织块漂浮数为0vs13;培养成功率为(86.0±2.7)％vs(44±4)％,细胞数量为(24.7±3.6)×104vs(5.1±1.0)×104,2组相比差异均有统计学意义(P＜0.01).P3细胞阳性表达CD44+、CD73+、CD90+、CD105+,阴性表达CD34+、CD45+,具有向成骨、脂肪、软骨分化潜能.细胞在DBM上的黏附率为(81.3±4.7)％,相容性好,构建TEB上的种子细胞随时间增殖.结论 新分离方法可以简化、规范操作过程,提高组织块的利用率,获取大量细胞(提高15 ～ 20倍).细胞与DBM相容性好,可成功构建TEB.
