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不同方法诱导THP?1细胞分化效果比较
目的 优化不同方法刺激THP?1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础.方法 首先用PMA和GM?CSF/M?CSF两种方法刺激诱导THP?1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况.结果 两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致.THP?1?M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP?1?M2细胞高表达CD163和CD209;THP?1?DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c.PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM?CSF/M?CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长.结论 两种方法均能成功地诱导THP?1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法.
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TLR2配体促进THP?1细胞表达多种趋化因子
目的 探讨Toll样受体2(TLR2)配体肽聚糖(PGN)和脂磷壁酸(LTA)对THP?1细胞表达趋化因子的影响.方法 THP?1细胞用不同浓度(1、10、100μg/mL)PGN或LTA刺激后,收集细胞提取mRNA进行实时荧光定量PCR检测,收集培养上清进行ELISA检测.抑制实验中,THP?1细胞先用信号分子抑制剂预处理,与PGN或LTA孵育后,再进行实时荧光定量PCR检测.结果 刺激6 h,浓度为10μg/mL的PGN和LTA能显著促进CCL2、CXCL8和CXCL10 mRNA的表达(P<0.05),当浓度提高至100μg/mL时,PGN和LTA能更显著促进CCL2、CXCL8和CXCL10 mRNA的表达(P<0.001);刺激24 h,浓度为10μg/mL的PGN或LTA能显著促进THP?1细胞释放趋化因子CCL2、CXCL8和CXCL10;不同信号分子抑制剂有差异地抑制PGN或LTA介导上调的CCL2、CXCL8和CXCL10的表达.结论 TLR2配体PGN和LTA促进THP?1细胞表达趋化因子CCL2、CXCL8和CXCL10 mRNA,受信号通路MPAK和NF?κB差异调控.
