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封闭群斑马鱼的STR遗传检测技术
目的 以AB、LF、ST(本地短尾,short tail)三个封闭群斑马鱼的基因组DNA为主要研究对象,采用STR (short tandem repeat) 引物扩增方法分析不同种群在核酸水平的异同.方法 利用5对斑马鱼STR引物和3对剑尾鱼STR引物,优化PCR条件,对不同种群斑马鱼DNA进行扩增.结果 Z24、Z9384、Z10508、Z20046这4对引物可扩增出稳定条带.除Z24的3对STR引物在群内和群间均表现出多态性.对扩增不同带型进行统计分析,Z20046群间差异显著(P<0.01),Z9384有群间差异(P<0.05),Z10508扩增结果无统计学差异(P>0.05).结论 鉴于该方法操作简便,通过进一步研究,可为封闭群斑马鱼的遗传质量评价打下基础.
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人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库的构建及鉴定
目的:构建人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定基础.方法:用Trizol方法提取人乙型肝炎肝硬化组织总RNA,并用mRNA纯化试剂盒进行mRNA纯化;反转录合成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后,用Sfi I酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4 kb以上的cDNA组分,并与λTripl Ex2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;鉴定文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增;鉴定扩增文库的滴度和重组效率;随机挑取11个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果:未扩增文库滴度为1.03×106 pfu/ml,重组效率为97.24%,扩增后文库滴度为1.36×109 pfu/ml,重组效率为99.02%;用载体两端的通用引物进行PCR鉴定,插入片段平均长度为1.02 kb,含1 kb以上的占36.36%,0.5～1 kb的占63.64%.结论:已成功构建一高质量的人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定了基础.
