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载体介导shRNA对胃癌细胞株MKN45中C-met的抑制作用
目的 探讨载体介导短发夹核糖核酸(shRNA)对胃癌细胞株MKN45中原癌基因C-met的抑制作用.方法 9株胃癌细胞株分为转染组、阴性对照组和空白对照组, 各3侏.通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术, 观察转染24 h和48 h后, 原癌基因C-met的信使核糖核酸(mRNA)的CT值的变化;通过免疫印迹试验(Western blot), 观察转染后C-met的蛋白变化;通过四氮唑盐MTT比色法, 计算细胞存活率.结果 载体介导的C-met shRNA转染24 h和48 h后, RT-PCR结果 显示, C-met的mRNA抑制率分别为56%和88%;与空白对照组比较, C-met的蛋白表达水平明显下降, 转染后24 h [(0.812±0.105) VS (0.640±0.011)]、48 h[(0.811±0.103) VS (0.331±0.009)], 差异均有统计学意义(P<0.05);MTT比色法显示, 细胞存活率均有明显下降, 转染后24 h为65.9%, 48 h为59.6%.结论 载体介导的C-met shRNA不仅可降低胃癌细胞株MKN45中原癌基因C-met的mRNA及其蛋白表达水平, 而且对癌细胞的存活有明显的抑制作用.
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c-met癌基因在乳腺癌增殖及血管生成中的作用
目的:探讨原癌基因c-met在乳腺癌增殖及微血管生成中的作用, 为临床乳腺癌的病情预测及预后判断提供新的实验依据.方法:通过S-P免疫组织化学方法和微血管密度计数(MVD), 检测75例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺纤维腺瘤组织中原癌基因c-met的表达情况和微血管密度.结果:乳腺癌组织c-met 阳性表达与组织学分级、淋巴结转移、肿瘤分期显著相关(P<0.05),而与年龄、病变部位、月经情况、雌激素水平、孕激素水平、肿瘤大小无关(P>0.05).微血管计数与c-met 阳性表达显著相关(P<0.01).结论:c-met癌基因在乳腺癌中表达增强与乳腺癌肿瘤细胞增殖状态及微血管生成直接相关,可以成为判断乳腺癌预后的一个有价值的指标.
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原癌基因c-met mRNA实时荧光定量PCR参考标准的构建
目的构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准以定量检测原癌基因c-met mRNA的表达.方法以Trizol裂解抽提法提取新鲜肝组织总RNA.以RT-PCR法制备c-met cDNA目的片段并进行扩增;以A-T载体克隆法将纯化的目的片段与pGEM-T Easy Vector连接成重组质粒并转化E.coli DH5α.采用碱裂解法提取重组质粒,联合用直接PCR、α互补法和氨苄青霉素筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并测定A260,从而确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备FQ-PCR梯度浓度标准.结果 c-met cDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性.结论成功构建了c-met实时FQ-PCR参考标准.
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c-met癌基因与乳腺癌血管生成的相关性研究
目的 探讨原癌基因c-met在乳腺癌血管生成中的作用及其临床意义，为寻求抗人乳腺癌血管生成药物提供依据。方法应用SP免疫组化和计算机图像分析技术，对80例乳腺癌、20例乳腺纤维腺瘤的微血管密度和c-met蛋白表达进行定量测定。结果乳腺癌组织微血管计数、c-met阳性表达与组织学分级、淋巴结转移、肿瘤分期显著相关(P<0．01)。高微血管计数与c-net阳性表达显著相关(P<0．01)。结论原癌基因c-met激活参与调控乳腺癌的肿瘤血管生成，是一重要的预后因素。
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HGF-c-met信号转导与肿瘤侵袭和转移的关系
肝细胞生长因子(HGF)是一种多功能细胞因子,HGF通过与c-met受体结合激活受体酪氨酸蛋白激酶活性调节细胞的分裂、增殖、分化、迁移等.故HGF-c-met信号转导在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用.
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原癌基因c-met和半乳糖凝素-3在甲状腺肿瘤中的表达
目的 探讨原癌基因c-met和半乳糖凝素-3(Gal-3)在甲状腺肿瘤中的表达特点及在鉴别诊断中的价值.方法 采用PV-6000通用型免疫组织化学二步法检测正常甲状腺组织10例、结节性甲状腺肿15例、甲状腺腺瘤25例、甲状腺滤泡癌20例、甲状腺乳头状癌3l例、甲状腺未分化癌2例中c-met和Gal-3的表达.结果 c-met和Gal-3在滤泡癌、乳头状癌及未分化癌中的阳性表达率高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿.c-met表达的强阳性率与淋巴结转移有关,Gal-3表达的强阳性率与甲状腺癌组织分化程度、临床分期、淋巴结转移有关.癌旁正常甲状腺组织中c-met和Gal-3表达均为阴性.甲状腺癌c-met的阳性表达与Gal-3的阳性表达呈正相关关系.结论 c-met和Gal-3过表达与甲状腺肿瘤的发生、发展密切相关,对甲状腺肿瘤的鉴别以及预后的评估有一定的价值.
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术前彩色超声联合c-Met蛋白在诊断甲状腺癌早期颈淋巴转移中的作用
目的 探讨术前彩色超声联合c-Met蛋白在诊断甲状腺癌早期颈淋巴转移中的作用.方法 选择94例行手术治疗的甲状腺癌患者作为研究对象,入选患者术前均进行彩色超声、c-Met蛋白表达水平及病理检查,并计算诊断的灵敏度、特异度及准确性,比较不同检查手段在甲状腺癌早期颈淋巴转移中的应用价值.结果 术前彩色超声对于中颈部淋巴结转移的检出率明显高于其他部位(P<0.05).术前彩色超声检查准确率为78.73％,其中出现9例漏诊,2例误诊.c-Met蛋白表达检查甲状腺癌淋巴结转移的准确率为90.42％,其中出现7例漏诊,1例误诊.评估甲状腺癌早期淋巴结转移,彩色超声检查的灵敏度为80.00％,特异度为77.97％;c-Met蛋白的灵敏度为82.86％,特异度为94.92％;联合二者检查的灵敏度为91.43％,特异度为96.61％;联合检查诊断甲状腺淋巴结转移的灵敏度、特异度及准确率明显高于单用彩色超声检查及c-Met蛋白检测(P<0.05).结论 术前彩色超声联合c-Met蛋白检测对甲状腺癌早期颈淋巴转移具有较高的诊断价值,可为临床制订手术策略提供客观依据.
