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高效液相色谱法测定草酸钙结石大鼠尿中草酸含量
目的 建立高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠尿液中草酸含量.方法 将SPF级雄性健康Wistar大鼠24只采用随机数字表法分为空白对照组(n=12)和乙二醇组(n=12).空白对照组给予去离子水喂养,每天以1ml生理盐水灌胃;乙二醇组给予1％乙二醇自由饮水喂养,每天2％氯化铵2ml灌胃.造模28 d后收集两组大鼠24 h尿液,采用HPLC法测定尿中草酸含量,并与铬酸钾氧化甲基红催化光度法的结果进行比较.HPLC法采用色谱柱Aglient 5TC-C18(250×4.6 mm,5μm),以甲醇(0.1 mol/L)、醋酸铵水溶液(15:85)为流动相,流速为1.2 ml/min,紫外检测波长为314 nm,柱温20℃.结果 大鼠尿液中高、低浓度草酸标准曲线分别为y=5909.1x+ 378730,R2=0.9984和y=7810.5x-16635,R2=0.9967;低检测浓度为5μg/ml,大鼠尿液中草酸高浓度线性范围为62.50～2000.00 μg/ml,低浓度线性范围为6.25 ～ 100.00 μg/ml.平均回收率为95.1％,日内及日间精密度分别为3.4％ ～ 10.8％和3.8％ ～9.4％.HPLC法和铬酸钾氧化甲基红催化光度法均显示乙二醇组大鼠尿草酸浓度和24h尿草酸含量显著高于空白对照组[尿草酸浓度:(736.35 ±254.52) μg/ml比(51.56±36.34) μg/ml,(687.35 ±234.53) μg/ml比(50.24±42.34)μg/ml;24h尿草酸含量:(11.23 ±4.12) mg比(0.87 ±0.45) mg,(9.89±3.55) mg比(0.77 ±0.65) mg;P均＜0.01];两种方法检测出的尿草酸浓度和24h尿草酸含量差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 HPLC法简单快速、回收率高、精密度好,与铬酸钾氧化甲基红催化光度法检测结果一致,适用于大鼠尿中草酸含量的测定.
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RP-HPLC法测定人血液和尿液中草酸
目的 建立RP-HPLC法测定人血液与尿液中草酸的质量浓度,监测原发性高草酸盐尿症(PH)患者,实施肝肾联合移植术前后草酸质量浓度的变化.方法 采用Agilent XDB C1a(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;Agilent Zorbax extend-C18(12.5 mm×4.6 mm,5μm)为预柱;流动相为甲醇-0.1 mol/L醋酸胺水溶液(15:85),体积流量1.2 mL/min;紫外检测波长314 nm;柱温26.3℃;进样量50 μL;以邻苯二胺为衍生剂,与血液与尿液中草酸反应,生成具有强紫外吸收化合物2,3-二羟基喹喔啉.结果 血液中低检测草酸质量浓度为0.3 mg/L,线性范围为1.953～125 mg/L,平均回收率为94.89％,精密度RSD为4.1％;尿液中草酸低检测质量浓度为0.5 mg/L,线性范围为1.953～125 mg/L,平均回收率为94.31％,精密度RSD为3.2％.结论 该方法简便,灵敏度高,重复性好,回收率高,是临床检测草酸质量浓度的可信方法.
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大鼠肾草酸钙结石致肾脏损伤的Smad通路参与作用研究
目的:对大鼠肾草酸钙结石致肾脏损伤的Smad通路参与作用进行研究,为临床治疗提供参考.方法:清洁级SD大鼠随机分为3组:对照组、肾草酸钙结石模型组和转化生长因子(TGF) β-Smad通路抑制剂吡非尼酮组.乙二醇+α羟基维生素D3为诱石剂复制肾草酸钙结石模型,吡非尼酮组大鼠给予吡非尼酮灌胃治疗,分析3组大鼠血清中肌酐、尿素氮及24 h尿草酸和肾组织钙水平,荧光定量PCR法检测肾脏组织中Bax/Bcl2蛋白和Caspase3蛋白表达,检测肾脏组织中TGFβ、Smad1、Smad2和Smad3蛋白表达.结果:与对照组大鼠相比,模型组大鼠血清中肌酐、尿素氮及24 h尿草酸水平明显升高(P＜0.01),Bax蛋白和Caspase3蛋白mRNA明显升高而Bcl2水平明显降低(P＜0.01),且TGFβ、Smad1、Smad2和Smad3蛋白表达明显增强(P＜0.01),而吡非尼酮能够有效的恢复上述指标的异常.结论:激活的TGFβ-Smad信号转导通路参与了大鼠肾草酸钙结石损伤病理学过程.
