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阿片类药物长期作用对μ-中国仓鼠卵细胞基因表达的影响及与PC12细胞线粒体膜电势之间的关系
目的从基因水平人手,筛选DAMGO长期作用后μ-中国仓鼠卵细胞(μ-CHO)差异表达的基因,初步研究阿片类药物与PC12细胞线粒体膜电势之间的关系.方法选用μ受体特异性激动剂DAMGO长期(72 h)作用于μ-CHO细胞,模拟耐受成瘾.利用差异显示PGR、克隆、Northern印迹分析等找出表达水平有改变的基因,测序,并与NIH Blast数据库中序列比对.利用激光共聚焦显微成像、线粒体膜电势测定等方法,观察吗啡短期与长期作用PC12细胞线粒体膜电势的变化.结果其中一条基因在用DAMGO长期刺激μ-CHO细胞后基因水平出现上调,并与大鼠线粒体膜上H+/磷酸基同向转运蛋白编码基因同源性很高.线粒体膜电势测定发现,用10-6～10-4mol/L吗啡短时间(2 h)作用PC12细胞后,细胞内线粒体膜电势部分丧失或完全丧失;长时间(12～60 h)作用后,膜电势出现从部分丧失、完全丧失到逐步恢复的现象,上述现象均能被阿片受体拮抗剂纳洛酮阻断.结论初步提示阿片类药物长期作用含有阿片受体的细胞后,可导致细胞线粒体功能改变,推测阿片类药物可能影响细胞线粒体电子转移、ATP合成过程,此过程可能与阿片类药物长期激活阿片受体导致的成瘾、耐受有关.
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简化的差示PCR技术在伯氏疟原虫氯喹抗性基因分离中的应用
目的为探察伯氏疟原虫氯喹抗性株(RC株)和敏感株(N株)的遗传学差异。方法先维持对RC株连续大剂量氯喹治疗(50mg／(kg·d)，再通过简化逆转录差示多聚酶链反应技术(sDDRT-PCR)寻找RC株和N株疟原虫cDNA差异片段并对所产生的可疑差异片段进行反复的DNA回收和PCR鉴定，然后选其肯定的差异片段(N25和R25)作克隆测序和序列分析及同源性检索。结果尽管差异片段N25和R25的克隆分子N252和R251的DNA序列相同性为99.8％，但由于多点突变导致它们的编码氨基酸及其模拟二级结构出现很大差异。BLAST(2.06)检索未能在基因库中发现与R251和N252相似的基因序列，不过它们的部分核苷酸序列(从128nt到189nt)与褐鼠磷脂酶BmRNA部分序列(从1053nt到1114nt)具有高度同源性：在R251和N252分别为93.5％和91.9％。结论简化的差示PCR技术结合差异片段的反复验证和序列分析可用于氯喹抗性相关基因的分离。
