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MSCs修饰受体胸腺对异种心脏移植免疫排斥反应的作用研究
目的大鼠胸腺以豚鼠骨髓间充质干细胞进行修饰,然后行豚鼠到大鼠的异种心脏移植.研究以间充质干细胞修饰胸腺对异种移植心脏存活时间的影响.方法供体豚鼠和受体SD 大鼠各20 只随机分成四组,A 组(对照组);B组(胸腺修饰IT 组);C 组(CVF 组);D 组(IT 加CVF 组).观测指标:移植心脏存活时间,病理变化,供受体异种淋巴细胞毒性试验.结果供心平均存活时间:A 组(23.20±6.14)min,B 组(24.20±9.28)min,C 组(335.40±49.23)min,D 组(451.00±50.10)min.A 与B 组两组比较,差异无统计学意义(P > 0.05).C、D 组平均存活时间较A、B 明显延长,差异有统计学意义(P < 0.05).D 组与C 组组间比较差异有统计学意义(P < 0.05).供受体淋巴细胞反应,测得光密度值分别为:D 组为(381.20±12.01),A 组为(590.20±15.38),胸腺修饰组明显低于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05).结论豚鼠到大鼠心脏异种移植中,豚鼠MSCs 修饰大鼠胸腺,当克服HAR 后可以延长供心存活时间,但并不能完全克服AVR 的发生.
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MSCs修饰受体胸腺的异种心脏移植中Th2细胞的表达研究
目的 研究胸腺修饰对异种移植免疫排斥反应的影响,探讨Th2 细胞的作用.方法将供体豚鼠(20 只)和受体SD 大鼠(20 只)随机分成四组,A 组(对照组);B 组(胸腺修饰IT 组);C 组(CVF 组);D 组(IT 加CVF 组),每组各10 只,5 只供体豚鼠,5 只受体SD 大鼠.观测指标:脾脏GATA-3,CCR3 变化.结果脾脏GATA-3 的表达,测得灰度值分别为:A 组:80.718±1.650,B 组:81.510±1.890,C 组:166.160±7.360,D 组:115.074±3.090;D 组表达较C 组弱,差异有统计学意义(P ＜ 0.05).C 组的脾脏GATA-3、CCR3 免疫组化较D 组表达明显增强.结论 Th2 细胞的增殖通过豚鼠MSCs 修饰大鼠胸腺被有效抑制,从而使大鼠IgG 类诱生异种抗体的产生也受到抑制.
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胸腺应急修饰诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受
目的:与以往术前21天进行胸腺修饰常规方法不同,在手术当天进行胸腺内注射抗原,诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受.方法:在大鼠腹腔异位心脏移植模型中,实验组在手术当天将供体SD大鼠脾细胞注射到受体Wistar大鼠胸腺,并以FK506短程处理受体鼠.单纯药物对照组在围手术期使用FK506但不进行胸腺内注射供体脾细胞;经典方法诱导组,腹腔注射抗淋巴细胞血清ALS(-1天)+胸腺内注射供体脾细胞(-21天);无处理组,单纯将SD大鼠心脏移植到Wistar大鼠腹腔.观察供心存活天数、病理改变及混合淋巴细胞反应等指标的变化.结果:实验组供心存活时间较对照组明显延长,而与经典诱导组比较无统计学差异.实验组和经典诱导组的供受体脾细胞混合淋巴细胞培养各组增殖反应均较无处理组降低,而两者之间无差异.结论:心脏移植手术当日胸腺内注射供体同种抗原,同时给予短程免疫抑制剂与术前21天胸腺注射的经典诱导组同样能诱导宿主对移植物的低反应状态(免疫耐受或免疫抑制).
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胸腺修饰联合照射预处理受体在猪-猴心脏移植中对补体的影响及机理探讨
目的:探讨补体在异种大动物猪-猴心脏移植排斥反应中的作用.方法:选用猪-新生猴腹腔心脏异位模型,通过异种胸腺修饰加60C o γ照射途径.结果:预处理组移植前补体水平较空白组无明显变化,但随着IgM、IgG水平的上升,排斥时C3、CD46水平显著降低.在照射+胸腺注射组中,猕猴特异性抗猪抗体IgM及IgG的上升速度均较照射组和空白组明显延缓,且存活期较空白组明显延长.MLR检测在照射+胸腺注射组接受脾细胞胸腺内注射后第3周,其刺激效应较空白组、照射组下降明显(P<0.01).结论:补体通过经典途径参与超急性及延迟性异种排异反应的发生,补体本身并不直接损伤内皮细胞,而需要有抗体的参与.通过异种胸腺注射联合照射预处理在抑制T细胞免疫及体液免疫方面有重要作用,但尚无法起到抑制异种排异反应中补体激活的作用.
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异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响
为观察异种胸腺修饰对大鼠抗豚鼠天然抗体产生的影响,将供体豚鼠和受体SD大鼠随机分成对照组(a组)、全身照射组(b组)、照射+胸腺注射组(c组),a组大鼠腹腔内注射经处理的豚鼠脾淋巴细胞(5×106个),7 d后流式细胞仪法检测抗豚鼠IgM及IgG类天然抗体水平的变化,b、c组在腹腔注射异种抗原前17 d接受全身照射,c组大鼠另在全身照射后3 d接受胸腺内豚鼠脾淋巴细胞注射.结果表明:a组和b组中,腹腔注射后两类天然抗体的水平均明显上升(P＜0.01),c组中,腹腔注射后IgM类的水平亦明显上升(P＜0.01),而IgG类上升受抑.提示异种胸腺修饰能抑制IgG类天然抗体的生成,但对IgM类天然抗体的产生无明显影响.
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笼养恒河猴血清天然抗体IgM的检测
采用流式细胞术连续监测8只幼年猴自出生后1月～5月天然抗体的演变,并检测9只成年猴天然抗体IgM水平.幼年猴1月龄前天然抗体IgM阳性细胞比例较低(9.9%±6.3%),到3月龄时可达成年猴的40%,5月龄时接近成年水平.9只成年猴天然抗体IgM阳性细胞比例变化幅度很大,从94.9%到26.3%(均数77.3%±21.5%).提示3月龄前幼年猴可用作避免超急性排斥反应的受体模型.不管是成年猴还是幼年猴,被选择为实验受体进行移植研究时,应事先对其体内的天然抗体水平进行检测,以确保实验的可比性.
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异种胸腺修饰和全身照射在猪-猴心脏移植模型中对抗体产生的影响
为观察胸腺修饰和全身照射预处理受体对猕猴抗猪抗体产生的影响,将受体中国猕猴随机分成空白组(A组)、全身照射组(B组)、照射+胸腺注射组(C组),用流式细胞仪法监测猕猴外周血细胞表面IgM、IgG阳性细胞的百分比在预处理前后及移植后的变化.结果表明:全身照射后,IgM类天然抗体阳性细胞的百分比水平较空白组明显下降(P＜0.01),而IgG类天然抗体阳性细胞的百分比水平无明显变化;在移植后,照射+胸腺注射组的IgM类诱生抗体阳性细胞的百分比水平及IgG类诱生抗体阳性细胞的百分比水平较空白组及全身照射组上升延缓.提示异种胸腺修饰能抑制IgM及IgG类诱生异种抗体的产生.
关键词： 胸腺修饰 诱生异种抗体 异种移植 急性体液性异种移植排斥反应 -
猪到猴异种胸腺修饰对猪心脏移植物存活及与外周血IL-2水平的影响
选用猪-新生猴腹腔心脏异位模型,通过异种胸腺修饰加60Co γ照射途径,来探讨此途径对异种器官移植中T细胞的作用及诱导异种T细胞中枢性耐受的可能性,并进一步研究外周血IL-2水平与排斥反应的关系.结果发现:MLR检测在照射+胸腺注射组接受脾细胞胸腺内注射后第3周,其刺激效应较空白组、照射组下降明显(P＜0.01).照射+胸注组存活期较空白组明显延长(P＜0.01),照射+胸注组存活期较胸注组和照射组延长(P＜0.05).IL-2和IL-10检测的结果表明,各组在排斥时均表现为IL-2水平较移植前显著升高(P＜0.001),胸注+照射组和胸注组,受体体内IL-2水平,在移植后早期与移植前比较无显著性差异(P＞0.05),与同时期单纯照射和空白组术后比较有显著差异(P＜0.01).结果表明:异种胸腺注射可诱导供体特异性的T细胞功能抑制,异种胸腺注射联合照射可有效地延长供心存活时间.IL-2水平与排斥反应的发生关系密切,可以作为监测晚期排斥反应发生的一个重要指标.
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异种骨髓间充质干细胞胸腺修饰诱导免疫耐受的可行性研究
目的:确定骨髓间充质干细胞(BMSCs)在异种胸腺内的演化过程,为进一步进行BMSCs胸腺修饰诱导异种免疫耐受的研究提供可行性依据.方法:取豚鼠BMSCs经分离纯化体外扩增至第3代,并行胎牛血清-Fe2O3和4,6-二咪基-4-联苯基吲哚(DAPI)标记,标记后的豚鼠BMSCs行胸腺注射,7天后进行切片普鲁士蓝-中性红染色和荧光显微镜观察豚鼠BMSCs演变过程.结果:BMSCs移植至异种胸腺中能够生存,并能转化为多种组织细胞成分,即仍具有多向分化能力.结论:异种BMSCs胸腺修饰在诱导异种受体移植免疫耐受方面将是可行的.
关键词： 胸腺修饰 骨髓间充质干细胞 胎牛血清-Fe2O3 免疫耐受 -
猪到猴异种胸腺修饰对受体心脏移植物存活时间及外周血T细胞的影响
目的通过猪-猴心脏移植模型来探讨异种胸腺修饰对移植物存活时间的影响,并在此基础上,研究异种器官移植中T细胞的作用及诱导异种T细胞中枢性耐受的可能性.方法将受体(中国猕猴)分为4组:(1)空白组:对受体不作任何处理.(2)照射组:于心脏移植前30 d(d30),接受60Co 3Gy全身剂量,余同空白组.(3)胸腺注射组:于心脏移植前21 d(d21),胸腺内注射供体脾细胞(5×107),余同空白组.(4)照射+胸腺注射组(8只):于心脏移植前28 d(d28),即1.5月龄时接受60Co 3Gy全身剂量,心脏移植前21 d(d21),胸腺内注射供体脾细胞(5×107),余同空白组.结果照射+胸注组存活期较空白组明显延长(P<0.01),照射+胸注组存活期较胸注组和照射组延长(P<0.05).CD4+、CD8+与同期未照射的另两组相比有显著性差别(P<0.01),但照射的两组同期相比差别不大(P>0.05).照射+胸腺注射组于手术当天MLR刺激效应较空白组、照射组下降明显(P<0.01),同时单独胸腺注射组与照射组、照射+胸腺注射组相比,刺激效应也有所下降(P<0.05).结论 (1)异种胸腺修饰对CD4+、CD8+T细胞亚群的生成与分布情况并无影响,但其针对异种抗原反应能力有所下降.(2)异种胸腺注射可支持T细胞的重建和诱导供体特异性的T细胞功能抑制或耐受,并有效地延长供心存活时间.
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供体血管内皮细胞胸腺修饰对猪-猴心脏移植的影响
目的探讨胸腺修饰对大动物异种心脏移植的影响,建立猪-猴异种心脏移植模型.方法受体猕猴随机分成4组:对照组、照射组、照射+胸注1640组和照射+胸注供体血管内皮细胞(VECs)组,对受体进行不同预处理后,作猪-猴腹腔异位心脏移植.同时在移植前作供体VECs溶解率和供体VECs与受体淋巴细胞(猴T细胞)的混合细胞反应检测.结果照射+胸注猪VECs组平均供心存活时间(Mean Survival Time,MST)显著延长(124.2±4.2h),超过照射组(65.2±6.6h)、照射+胸注1640组(63.0±4.0h)和对照组(36.2±5.9h)(P<0.05).同时,该组供体VECs溶解率显著下降(P<0.05),受体T细胞增殖显著受抑制(P<0.05).结论供体VECs(猪VECs)胸腺修饰可通过抑制受体(猴)T细胞的识别与增殖,减轻供心VECs激活,终缓解延迟性异种排斥反应(Delayed Xenograft Rejection,DXR),从而使供心存活时间显著延长,但不能完全克服DXR.
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胸腺修饰在猪心脏移植免疫耐受诱导中的应用
目的 探讨胸腺修饰用于猪心脏移植免疫耐受诱导的可能性.方法 将实验动物随机分为A、B、C三组,各5头.A组仅行异位心脏移植,B组在A组基础上用全身照射,C组全身照射加胸腺内注射供体脾细胞.用混合淋巴细胞反应(MLR)来了解其免疫功能的相关改变.预处理后2周,行异位心脏移植,术后检测IL-2、IL-10水平,并观察移植心脏的生存时间.结果 在C组受体胸腺修饰后第2周,混合淋巴细胞反应刺激效应有所下降(P＜0.05),而A组预处理前后无显著差异,(P＞0.05).C组供心存活期5.6 d,较A组2.4 d和B组2.2 d明显延长,(P＜0.05),而空白组与单纯照射组比较P＞0.05.实验组移植后1～3 d动物血清 IL-2的水平明显低于对照组和空白组(P＜0.05),IL-10水平三组无明显差异(P＞0.05).结论 实验动物预处理后,产生了一定程度的免疫抑制,但并未获得"永久性"免疫耐受.
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胸腺修饰诱导大鼠心脏移植耐受与白细胞介素-2,10的关系
目的在手术当天进行胸腺修饰,诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受,并对其可能机制作初步分析.方法通过胸腺注射和围手术期短程使用FK506来诱导心脏移植耐受,观察供心存活天数、混合淋巴细胞反应及受体鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-10水平的变化.结果无处理组、对照组、经典诱导组和实验组供心存活时间分别为(6.8±1.9)、(17.4±5.1)、(73.8±8.6)、(55.0±24.7)d,实验组与经典诱导组比较差异无统计学意义(P＞0.05).无处理组、经典诱导组和实验组的供受体脾细胞混合淋巴细胞培养刺激效应分别为198.72%、95.80%、67.94%,实验组和经典诱导组较无处理组增殖反应均明显降低(P＜0.05),而两者间增殖反应差异无统计学意义(P＞0.05).IL-10水平在无处理组移植心脏被排斥时为(48.10±5.14)ng/L较移植前(52.60±10.14)ng/L差异无统计学意义(P＞0.05);而在实验组早期呈低水平表达,为(36.10±2.30)ng/L,术后中期(281.80±65.44)ng/L晚期(80.90±12.39)ng/L较移植前水平高得多,差异有统计学意义(P＜0.05).受体IL-2水平在无处理组发生排斥时为(159.80±59.19)ng/L较移植前(54.80±8.42)ng/L明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论心脏移植手术当日胸腺内注射供体同种抗原,与术前21 d胸腺注射的经典诱导组同样能诱导宿主对移植物的低反应状态;IL-2的水平与排斥反应的发生有关,而IL-10可能是免疫耐受的特异性指标,IL-10更可能与免疫耐受的维持有关.
