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p53正向凋亡调控因子(PUMA)在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用
目的 研究吉西他滨体外对人胰腺癌AsPC-1细胞生长的作用机制.方法 用脂质体转染法将PUMA反义核酸(反义PUMA cDNA)的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1-导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度1、5、10和15mol/L的吉西他滨中作用72h..RT-PCR和Western blotting检测不同组细胞经吉西他滨作用72h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡.结果 吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞出现PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖.结论 吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关.
关键词： 胰腺癌 吉西他滨 凋亡 p53正向凋亡调控因子 -
p53正向凋亡调控因子在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用
目的:研究吉西他滨对人胰腺癌AsPC-1细胞体外生长的作用机制.方法:用脂质体转染法将含有p53正向凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)反义核酸的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度为1、5、10和15 μmol/L的吉西他滨溶液中作用72 h.RT-PCR和Western印迹法检测不同组细胞经吉西他滨作用72 h后的PUMA表达水平,MTT检测细胞生长抑制情况, FCM、Hoechst 33258荧光染色和TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞中PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞增殖明显增加.结论:吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制细胞生长,其诱导细胞凋亡与上调PUMA表达有关.
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丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注时NF-κB活化和PUMA表达的影响
目的 观察丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(IR)时核因子(NF)-κB活化和P53正向凋亡调控因子(PUMA)、Bcl-2和Caspase-3基肉表达的影响,并探讨其脑保护的机制.方法 90只雄性大鼠建立局灶性脑IR模型,随机分为IR组、丙泊酚组(P组)和假手术组(C组).缺血前腹腔注射丙泊酚100 mg/kg,各组再灌注时间为2、3、6、12、24、72 h.蛋白质印迹法检测不同时间点的NF-κB、PUMA,Bcl-2和Caspase-3表达,凝胶电泳迁移率(EMSA)检测12、24 h的NF-κB和PUMA活性;检测不同时间点Caspase-3活性;DNA Lader观察细胞凋亡.结果 与C组比较,IR组缺血侧大脑皮层于冉灌注2～24 h NF-κB、PUMA表达逐渐升高,72 h开始下降,Bcl-2在灌注6 h内表达降低,以后逐渐升高.而Caspase-3在灌注2～24 h内逐渐升高,72 h开始下降.与IR组比较,P组在灌注后的各个时间点NF-κB、PUMA表达明显减少,而Bcl-2表达逐渐升高,Caspase-3逐渐降低.IR组Caspase-3的活性在24 h高,72 h开始降低.在P组,Caspase-3蛋白活性升高小显著.DNA Lader发现,IR组6、12、24、72 h见明显的DNA片段,而在P组未见明显的DNA片段.结论 丙泊酚抑制NF-κB活化引起的PUMA上调,后者下调Caspase-3和上调Bcl-2,从而抑制神经组织细胞凋亡.
关键词： 丙泊酚 脑缺血-再灌注损伤 核因子-κB p53正向凋亡调控因子 -
PUMA在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用
h后的PUMA表达;MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)、Hoechst 33258荧光染色法和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞出现PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖.结论 吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制其生长,其诱导凋亡与上调PUMA有关.
关键词： 胰腺肿瘤 吉西他滨 细胞凋亡 p53正向凋亡调控因子 -
hTERT启动子调控的PUMA腺病毒转染卵巢癌COC1细胞的研究
目的：探讨卵巢癌COC1细胞中大量表达p53正向凋亡调控因子（PUMA）在抑制COC1细胞中的作用。方法采用人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的PUMA基因腺病毒载体（Ad-hTERT-PUMA）转染卵巢癌COC1细胞，通过细胞活性检测试剂盒和凋亡试剂盒研究COC1细胞的生长情况，同时分析表达PUMA的水平。结果转染Ad-hTERT-PUMA后，PU-MA大量表达，抑制COC1细胞生长，促进细胞凋亡。结论Ad-hTERT-PUMA成功转染卵巢癌COC1细胞并大量表达，起到了抑制卵巢癌细胞增长的作用。
关键词： 端粒 末端转移酶 p53正向凋亡调控因子 卵巢肿瘤 腺病毒科 -
hTERT启动子调控的PUMA重组腺病毒的构建与鉴定
目的：构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的PUMA基因腺病毒载体（Ad-hTERT-PUMA）及带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的腺病毒载体（Ad-hTERT-PUMA-EGFP）。方法采用一系列的分子生物学技术将 p53正向凋亡调控因子PUMA基因插入hTERT的启动子下游，再将EGFP为分子标记插入到PUMA基因下游，终将构建好的载体装入腺病毒。双酶切实验证明重组腺病毒载体 Ad-hTERT-PUMA和Ad-hTERT-PUMA-EGFP构建是否成功。结果载体均成功转配腺病毒。转染12 h后，部分HEK293细胞出现了绿色荧光，可维持到72 h。结论成功构建重组腺病毒载体Ad-hTERT-PUMA和Ad-hTERT-PUMA-EGFP。
关键词： 端粒 末端转移酶 p53正向凋亡调控因子 遗传学 腺病科
