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表达APP-C100和SOD1基因突变子的转基因小鼠血管反应性变化的研究
目的研究转单基因和转双基因小鼠外周微血管反应性改变的作用机制.方法在未转基因、转单基因和转双基因小鼠的后足爪垫皮肤暴露微血管网,灌注血管扩张剂乙酰胆碱和硝普钠,多普勒检测血液流量变化,应用Western blot检测小鼠外周血β-淀粉样蛋白(Aβ)水平.结果与未转基因和转单基因(表达SOD1基因突变子G93A)小鼠相比,2-3月龄转单基因(表达APP -C100、TgC100)和转双基因(APP-C100和SOD1基因突变子G93A基因共表达)小鼠外周血液流量下降28%,8-9月龄TgC100小鼠外周血液流量减少34%,TgC100和转双基因小鼠外周血A β水平较未转基因小鼠明显升高,差异有显著性意义(P<0.01).结论 TgC100和转双基因小鼠外周血管反应性的改变很可能由循环性可溶性Aβ引起,Aβ血管活性涉及内皮和非内皮机制.
关键词： 阿尔茨海默氏病 β-淀粉样蛋白 血流量 转基因小鼠 铜/锌超氧化物歧化酶 -
突变SOD1 cDNA在大鼠皮层神经元定位和作用
目的:分析一个ALS家系突变铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)基因在原代培养的大鼠皮层神经元中的定位及作用.方法:将构建好的含有SOD1正常基因与突变基因在内的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-hSOD1和pEGFP-mSOD1)分别转染大鼠皮层神经元,转染后观察绿色荧光在细胞内的分布情况,同时设对照组,检测神经元的SOD1活性、MDA含量及细胞活性.结果:转染后荧光物质表达于胞浆内,与转染pEGFP-mSOD1质粒的神经元相比,转染pEGFP-hSOD1质粒神经元的SOD1活性、MTT值显著增高,而MDA、LDH水平显著降低.结论:突变SOD1蛋白的酶活性下降,使脂质过氧化物相对增多,导致神经元损伤,可能是该家系发病的主要原因之一.
关键词： 肌萎缩侧索硬化症 铜/锌超氧化物歧化酶 神经元 -
基于差异蛋白质组学解析一贯煎对大鼠肝硬化形成的影响
目的:基于差异蛋白质组学探讨一贯煎干预肝硬化的部分效应机制.方法:48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(n=12)及造模组(n=36),采用50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)-橄榄油溶液1 mL/kg腹腔注射(2次/周,共9周)制备大鼠肝硬化模型.于开始造模后3周和6周分别随机处死6只大鼠,作药物干预前的动态观察,其余24只模型大鼠于开始造模后第7周首日随机分为模型组(n=12)及一贯煎干预组(n=12).大鼠于第9周末全部处死取材.双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肝组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质;差异蛋白质铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase, Cu/Zn SOD)和DJ-1表达采用蛋白印迹法及免疫组织化学方法进行验证.结果:获得分辨率高、重复性好的肝组织2-DE图谱,经质谱鉴定的50个差异蛋白质中,与氧化应激相关的5个蛋白质分别是Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽合成酶、谷胱甘肽S-转移酶Yb-1亚基、醛酮还原酶7,A2.与正常组大鼠比较,模型组肝组织Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2的表达均显著降低,其中Cu/Zn SOD、醛酮还原酶7,A2在造模3周、6周及9周后呈梯级下降,而DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶于造模3周、6周及9周后均呈低水平表达;谷胱甘肽合成酶表达显著升高.治疗结束后与模型组比较,一贯煎组Cu/Zn SOD、DJ-1、谷胱甘肽S-转移酶及醛酮还原酶7,A2表达均明显增高,谷胱甘肽合成酶表达显著降低.蛋白印迹法及免疫组织化学验证了Cu/Zn SOD、DJ-1在蛋白表达水平的差异,与蛋白质组学结果基本一致.结论:抗氧化应激功能降低是CCl4致大鼠肝硬化的重要病理环节,提高抗氧化应激功能相关蛋白的表达可能是一贯煎治疗CCl4所致大鼠肝硬化的主要效应机制.
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SOD1基因突变子对AD转基因小鼠β-淀粉样蛋白表达影响的实验研究
目的:探讨Cu/Zn SOD1基因表达对Aβ产生的影响.方法:建立APP-C100和G93A SOD1基因共表达的转双基因小鼠,应用免疫细胞化学方法测定不同鼠龄转基因鼠海马神经元Aβ表达,Westem blot定量测定转基因鼠脑SCD1、APP、APP-C100和Aβ表达水平.结果:低龄转双基因鼠与转单基因鼠之间Aβ水平无差异,与年龄匹配的转单基因鼠比较,高龄转双基因鼠脑Aβ水平升高,经统计处理差异无显著性意义(P＞O.05).但高龄转双基因鼠Aβ水平比低龄转双基因鼠明显升高(P＜0.05).结论:转双基因鼠脑APP-C100和G93A SOD1基因共表达虽然未导致老年斑形成,但引起Aβ含量增加,推测其机制可能与SOD1基因突变子引起的氧化应激反应有关.
关键词： 阿尔茨海默病 转基因鼠 β-淀粉样蛋白 铜/锌超氧化物歧化酶 -
探讨表达APP-C100和SOD1基因突变子的转基因小鼠血管反应性变化的机制
目的探讨转单基因和转双基因小鼠外周微血管反应性改变的作用机制.方法在未转基因、转单基因和转双基因小鼠的后足爪垫皮肤暴露微血管网,灌注血管扩张剂乙酰胆碱和硝普钠,多普勒检测血液流量变化,应用Western blot检测小鼠血中β-淀粉样蛋白(Aβ)水平.结果与未转基因和转单基因(表达SOD1基因突变子G93A)小鼠相比,2～3个月龄转单基因(表达APP-C100、TgC100)和转双基因(APP-C100和SOD1基因突变子G93A基因共表达)小鼠外周血液流量下降28%,8～9个月龄TgC100小鼠外周血液流量减少34%,TgC100和转双基因小鼠外周血Aβ水平较未转基因小鼠明显升高(P＜0.01).结论 TgC100和转双基因小鼠外周血管反应性的改变很可能由循环性可溶性Aβ引起,Aβ血管活性涉及内皮和非内皮机制.
关键词： 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 血流量 转基因小鼠 铜/锌超氧化物歧化酶
