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脂蛋白脂酶基因多态性与冠心病关系的研究
目的探讨脂蛋白脂酶基因的多态性与冠心病的相关性. 方法提取冠心病群体和正常群体的基因组DNA,借助聚合酶链反应扩增LPL基因的9个外显子及其侧翼的内含子序列,采用变性高效液相色谱技术对扩增的片段进行了筛查,并用双脱氧末端终止法对扩增的片段进行了DNA序列检测.结果在LPL 基因第5外显子发现了一未见文献报道的多态位点,即 G830→A转换,该变异导致LPL 基因第192 位的Arg(CGA)被Gln(CAA)取代.经χ2检验,由此多态产生的基因型A/A和等位基因A在对照组和冠心病组之间没有显著性差异(P>0.05).对冠心病患者组进一步采用χ 2检验,发现A/A基因型和A等位基因在合并有高甘油三酯/低高密度脂蛋白胆固醇血症的患者组和血脂正常的患者组之间存在显著性差异(P<0.05). 结论首次发现了LPL 基因G830A的多态性,该多态性(Arg192Gln)可能影响LPL的酶活性,导致高甘油三酯/低高密度脂蛋白胆固醇血症.该发现可能为探讨冠心病发病的分子机理有重要价值.
关键词： 脂蛋白脂酶 冠心病 基因突变 变性高效液相色谱技术 -
运用DHPLC技术进行脊髓性肌萎缩症SMN-T基因缺失检测的初步研究
目的评价变性高效液相色谱技术( denaturing high performance liquid chromatography, DH PLC)在脊髓性肌萎缩症( spinal muscular atrophy, SMA)端粒运动神经元生存基因( survival motor neuron telomeric copy, SMN- T)缺失筛查中的应用价值.方法应用扩增限制性长度多态性技术( PCR- RFLP)、 DHPLC及 DNA测序技术对 51例 SMA患儿及其双亲与 67例非 SMA患儿 SMN- T与着丝粒运动神经元生存基因( survival motor neuron centromeric copy, SMN- C)碱基差异位点 exon7( C/T)与 exon8( G/A)进行检测.结果 PCR- RFLP与 DHPLC技术均同时检出 45例 SMA患儿 SMN- T基因 exon7+ 8或 exon7纯合缺失, DNA测序证实了 PCR- RFLP与 DHPLC检测的可靠性.在 DHPLC检测中发现, 6例非 SMN- T纯合缺失患儿的 SMN- T与 SMN- C基因拷贝数存在不平衡;在 SMN- T基因纯合缺失患儿双亲中, 75.5%( 77/102例)的个体两基因拷贝数存在不平衡;在非 SMA对照组中, 22.4%的个体( 15/67例)两基因拷贝数存在不平衡,两组个体基因拷贝不平衡频率差异有显著性.结论 DHPLC技术不仅能快速有效地检出 SMN- T基因的纯合缺失,而且通过比较 SMN- T与 SMN- C基因拷贝数平衡与否,可初步提示患儿 SMN- T基因杂合缺失状态与双亲基因缺失的携带者状态,为进一步的基因突变筛查与产前诊断提供依据.
关键词： 脊髓性肌萎缩症 运动神经元生存基因 变性高效液相色谱技术 基因缺失 -
应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较
目的 比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用.方法 通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断.结果 100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例.结论 两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势.
关键词： PCR反向斑点杂交技术 悬浮点阵技术 变性高效液相色谱技术 β-地中海贫血 基因 -
DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响
背景与目的 : 变性高效液相色谱 ( denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC) 是近发展起来的一种灵敏而高通量的基因突变检测技术 , 在工作中我们发现某些因素 , 尤其是 DNA聚合酶干扰 DHPLC分辨力 . 本文详细地分析了具校正功能和非校正功能的 DNA聚合酶对变性高效液相色谱在基因突变检测中的影响 , 旨在寻找更适合 DHPLC分析的 DNA聚合酶 . 方法 : 选择长度为 268 bp、 317 bp、 590 bp的 3个代表性的片段用于 DHPLC分析 . 选择 6种品牌的 Taq DNA聚合酶 , 1种 Ampli-Taq gold DNA聚合酶 , 4种具校正功能的 DNA聚合酶 ( Pfu和 Vent) , 用这 11种酶扩增同一 DNA片段 , 并进行 DHPLC检测 , 分析并鉴定它们对 DHPLC峰型的影响 . 结果 : Taq DNA聚合酶对 DHPLC分析产生两种明显的负面影响 . 一是在 DHPLC图谱的主峰前 , 形成一个额外小峰 , 影响 DHPLC对杂合双链的分辨能力 . 另一种影响是难以形成正常的 DHPLC色谱图 , 导致 DHPLC检测的失败 . 具校正功能的 DNA聚合酶和 Taq gold DNA聚合酶对 DHPLC几乎不产生这些负面影响 . 结论 : 具校正功能的 DNA聚合酶比 Taq聚合酶更适合于 DHPLC突变或 SNP分析 , 尤其是 GC含量高的小片段或其它容易受干扰的片段应首选 Pfu DNA聚合酶用于 DHPLC分析 .
关键词： 变性高效液相色谱技术 DNA聚合酶 基因突变筛查 -
应用DHPLC筛查人类mtDNA高变区I的异质性
[目的]检测人类 mtDNA HVI区的异质性,建立有效的筛查低水平异质性 DNA的技术.[方法] 扩增人 mtDNA 的 HVI区内 269 bp的片段,以不同比例混合相差一个碱基的 2种 DNA片段的 PCR扩增产物,配制异质性 DNA模型,用变性高效液相色谱技术 (DHPLC)检测 ,确定佳检测条件.[结果] 应用 DHPLC检测 HVI区的片段 (269 bp),低可检测出含量为 5%的异质性样本.在 80例无关个体的 mtDNA 样本中 ,共检测到 15例具有异质性.[结论] 所建立的 PCR-DHPLC方法可用于检测 mtDNA的异质性.
关键词： 变性高效液相色谱技术 线粒体DNA 异质性 -
中国上海地区4719名孕妇脊髓性肌萎缩症携带者筛查
目的 对中国上海地区4719名孕妇进行脊髓性肌萎缩症携带者的筛查,为遗传咨询及进一步产前诊断提供依据.方法 应用多重PCR结合变性高效液相色谱技术进行SMN1及SMN2基因拷贝数的检测,筛查出SMN1拷贝数为1的脊髓性肌萎缩症携带者.结果 在4719份样品中共检测出SMA携带者90例.女性携带者频率为1.9％,其中SMN1杂合缺失占1.2％.由SMN1基因转换成SMN2基因者占0.6％.结论 确定上海地区女性脊髓性肌萎缩症携带者的频率可为遗传咨询及产前诊断提供理论依据,并降低脊髓性肌萎缩症患儿的出生率.
关键词： 脊髓性肌萎缩症 变性高效液相色谱技术 SMN1基因 SMN2基因 携带者筛查 -
四例马凡综合征患者的FBN1基因突变分析及产前诊断
目的 对4例马凡综合征(Marfan syndrome,MFS)患者进行原纤维蛋白-1基因(fibrillin-1,FBN1突变检测及产前诊断,为患者提供病因诊断和遗传咨询.方法 应用PCR扩增和DNA测序对4例典型的MFS患者进行FBN1基因筛查.确定突变类型后,于孕18～20周穿刺抽取羊水,抽提DNA,PCR扩增FNB1基因,对PCR产物进行双向测序.结果 例1 FBN1基因第46内含子的+1位碱基发生置换(IVS46+1G＞ A)；例2第35外显子的4453位碱基发生错义突变c.4453T＞G(Cys1485Gly)；例3第21外显子2585位碱基发生错义突变巴2585G＞A(Cys862Tyr)；例4第28外显子3536位碱基A缺失c.3536 delA.c.4453T＞G(Cys1485Gly)、c.2585G＞A(Cys862Tyr)和c.3536 delA为新突变.4例胎儿羊水的标本也分别检测到IVS46+1G＞A、c.4453T＞G(Cys1485Gly)、c.2585G＞A(Cys862Tyr)和c.3536 delA突变.结论 FBN1基因筛查可以检测出患者及其家系中胎儿的突变位点和类型,具有明确的诊断价值,有助于遗传咨询.
关键词： 马凡综合征 变性高效液相色谱技术 原纤维蛋白-1 基因突变 产前诊断 -
家族性腺瘤样息肉病中APC基因的胚系突变分析
目的探索有效的突变检测技术,系统分析家族性腺瘤样息肉病(familial adenomatous polyposis, FAP)相关基因结肠腺瘤病(adenomatous polyposis coli, APC)基因的胚系突变,及其与疾病表型的关系.方法从22例临床确诊的FAP患者,外周静脉血中提取基因组DNA.变性高效液相色谱、蛋白截短检测、测序技术结合应用进行全基因分析.根据患者临床资料,进行基因型-表型分析.结果 22例FAP患者中13例检出APC基因胚系突变,均为无义或移码突变.基因型-表型关系的初步分析表明,在基因5′端或3′端发生突变的患者临床症状较轻,在基因中段发生突变的患者临床症状典型或严重.结论本研究中所采用的技术体系可敏感、高效地检出APC基因突变,APC基因的突变型与FAP患者的临床表型存在关联,所采用的技术体系适用于FAP症状出现前的基因诊断.
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变性高效液相色谱技术检测PAI-1基因多点突变与冠心病相关分析
目的检测纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1; PAI-1)基因编码区多态性,并探讨其与冠心病的关系.方法使用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术和DNA序列测定方法检测了93例冠心病(coronary artery disease,CAD) 患者和123名正常对照者的基因组DNA.结果在PAI-1基因第2外显子中发现了两个单核苷酸多态性位点(G43A和G49A)均为鸟嘌呤(G)→腺嘌呤(A)突变,引起肽链上第15位丙氨酸变成苏氨酸(Ala15Thr)和第17位的缬氨酸变成异亮氨酸(Val17Ile),在所有对象中只发现了杂合型和纯合野生基因型携带者.分别分析了两个位点基因型与冠心病和PAI-1基因水平的关系.与冠心病组比较,对照组中具有更多的杂合基因型携带者,但差异无显著性.其不同基因型与PAI-1抗原水平没有明显相关性.结论用DHPLC技术检测了PAI-1基因两个多态性位点,此多态性与冠心病发病没有相关性.
